[發明專利]在表達PDX-1的神經內分泌腫瘤中靶向PDX-1癌基因的新治療性RNA干擾技術

有效

• 申請號: 201080060355.X
• 申請日: 2010-10-27
• 公開（公告）號: CN102782139A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: J·J·內姆納蒂絲;D·拉奧;F·C·布魯尼卡爾蒂
• 申請（專利權）人: 格蘭達利斯有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/113;A61K48/00;A61K31/7105;A61P35/00
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

1.一種表達載體，其包括：

啟動子；和

可操作地連接到該啟動子的核酸插入物，其中所述插入物編碼一個或多個短發夾RNA（shRNA），所述短發夾RNA能夠雜交到mRNA轉錄物的區域，所述mRNA轉錄物編碼PDX-1癌基因并且通過RNA干擾來抑制PDX-1癌基因的表達。

2.權利要求1所述的表達載體，其中所述shRNA結合一個或多個siRNA（切割依賴的）和miRNA（切割非依賴的）基序。

3.權利要求1所述的表達載體，其中所述shRNA是PDX-1癌基因表達的切割依賴和切割非依賴兩者的抑制劑。

4.權利要求1所述的表達載體，其中所述shRNA進一步限定為雙官能的shRNA。

5.權利要求1所述的表達載體，其中所述一個或多個shRNA包含選自以下的序列：SEQ.ID?NO:3、SEQ.ID?NO:4、SEQ.ID?NO:5、SEQ.IDNO:6、SEQ.ID?NO:7、SEQ.ID?NO:8以及它們的組合或修飾。

6.權利要求1所述的表達載體，其中所述靶向的區域是PDX-1癌基因轉錄物的3’UTR區域序列。

7.一種治療性遞送系統，其包括：

治療劑載體；和

表達載體，所述表達載體包括啟動子和可操作地連接到該啟動子的核酸插入物，所述插入物編碼一個或多個短發夾RNA（shRNA），所述短發夾RNA雜交到mRNA轉錄物的區域，所述mRNA轉錄物編碼PDX-1癌基因并且通過RNA干擾來抑制PDX-1癌基因的表達。

8.權利要求7所述的遞送系統，其中所述治療劑載體是壓縮的DNA納米顆粒。

9.權利要求8所述的遞送系統，其中所述DNA納米顆粒用一種或多種多陽離子進行壓縮。

10.權利要求8所述的遞送系統，其中所述一種或多種多陽離子是10kDA的聚乙二醇(PEG)-取代的半胱氨酸-賴氨酸3聚體肽（CK₃₀PEG10k）。

11.權利要求8所述的遞送系統，其中所述壓縮的納米顆粒進一步地包裹在脂質體中。

12.權利要求11所述的遞送系統，其中所述脂質體是兩層內陷的囊泡（BIV）。

13.權利要求11所述的遞送系統，其中所述脂質體是可逆掩蔽的脂質體。

14.權利要求11所述的遞送系統，其中所述脂質體使用一種或多種“巧妙的（smart）”受體靶向部分修飾。

15.權利要求14所述的遞送系統，其中所述一種或多種“巧妙的”受體靶向部分是小分子二價β-轉角模擬物。

16.權利要求7所述的遞送系統，其中所述治療劑載體是脂質體。

17.權利要求16所述的遞送系統，其中所述的脂質體是使用一種或多種“巧妙的”受體靶向部分修飾的兩層內陷的囊泡（BIV），其中所述脂質體是可逆掩蔽的脂質體。

18.權利要求17所述的遞送系統，其中所述“巧妙的”受體靶向部分是小分子二價β-轉角模擬物。

19.權利要求7所述的遞送系統，其中所述一個或多個shRNA包含選自以下的序列：SEQ.ID?NO:3、SEQ.ID?NO:4、SEQ.ID?NO:5、SEQ.IDNO:6、SEQ.ID?NO:7、SEQ.ID?NO:8以及它們的組合或修飾。

20.一種用于將一個或多個shRNA遞送到表達PDX-1癌基因的靶組織的方法，該方法包括以下步驟：

制備表達載體，所述表達載體包含啟動子和可操作地連接到該啟動子的核酸插入物，所述插入物編碼一個或多個shRNA，所述的shRNA雜交到編碼PDX-1癌基因的mRNA轉錄物的區域，并且該shRNA通過RNA干擾來抑制PDX-1癌基因的表達；

將該表達載體與治療劑載體組合，其中所述的治療劑載體是由一種或多種“巧妙的”受體靶向部分所修飾的脂質體；以及

將治療有效量的該表達載體和治療劑載體復合物給予需要其的患者。

21.權利要求20所述的方法，其中所述治療劑載體是壓縮的DNA納米顆粒。