[發明專利]用于以陣列狀配置動物細胞的基板的制造方法以及以陣列狀配置有動物細胞的基板的制造方法

無效

• 申請號: 201080049136.1
• 申請日: 2010-10-29
• 公開（公告）號: CN102712898A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 小山純弘
• 申請（專利權）人: 獨立行政法人海洋研究開發機構
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12M1/40;C12M3/00;G01N37/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 熊玉蘭;郭文潔

相關申請的相互參照

本申請主張2009年10月30日申請的日本特愿2009-250516號的優先權，其全部記載特別地合并于此作為公開。

技術領域

本發明涉及用于以陣列狀配置動物細胞的基板的制造方法，以及使用該方法的以陣列狀配置有動物細胞的基板的制造方法。

背景技術

嘗試以逐個的水平確定、選擇細胞，并使用所選擇的細胞。例如，對分別檢出逐個淋巴細胞的抗原特異性、進而回收所檢出的一個抗原特異性淋巴細胞、使用所回收的一個抗原特異性淋巴細胞，例如制造抗體進行了研究(專利文獻1)。

專利文獻1中，為了檢出抗原特異性淋巴細胞，而使用微孔陣列芯片。該微孔陣列芯片中，各微孔的形狀及尺寸具有一個微孔僅容納一個淋巴細胞的形狀及尺寸。

已知若在基板表面培養動物細胞則稱為細胞外基質的粘接蛋白質在細胞外形成，將細胞附著在基板表面。已知將如此附著在基板表面上的細胞剝離而利用。作為剝離方法，也已知利用電刺激(專利文獻2～4)。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1?日本特開2004-173681號公報

專利文獻2?日本特開2008-295382號公報

專利文獻3?日本特開2005-312343號公報

專利文獻4?日本特開平10-42857號公報

專利文獻1～4的全部記載特別地合并于此作為公開。

發明內容

但是，利用細胞外基質實現的細胞對基板表面的附著、通過電刺激進行的細胞的剝離未用作將動物細胞分別逐個地配置在基板表面上的技術方案。

本發明的目的在于提供不使用微孔就可以將動物細胞分別逐個地配置在基板表面上的新的技術方案。

本發明人為了達成上述目的而進行各種研究，結果發現，通過細胞外基質的吸附和利用細胞外基質的部分性的電刺激進行的剝離，可以形成可以個別附著動物細胞的培養基板，從而完成本發明。

本發明如下所述。

[1]?用于以陣列狀配置動物細胞的基板的制造方法，含有：

(1)?準備在電極基板表面上以陣列狀具有吸附用表面的基板的步驟，

(2)?在上述基板的電極表面及吸附用表面上吸附細胞外基質的步驟，和

(3)?對上述電極施加微弱電位，將電極表面的細胞外基質剝離，而得到在吸附用表面上吸附有細胞外基質的基板的步驟。

[2]?以陣列狀配置有動物細胞的基板的制造方法，含有：

(1)?準備在電極基板表面上以陣列狀具有吸附用表面的基板的步驟，

(2)?在上述基板的電極表面及吸附用表面上吸附細胞外基質的步驟，

(3)?對上述電極施加微弱電位，將電極表面的細胞外基質剝離，而得到在吸附用表面上吸附有細胞外基質的基板的步驟，和

(4)?在步驟(3)中得到的基板表面上培養動物細胞，得到在吸附用表面上附著有動物細胞的基板的步驟。

[3]?[1]或[2]中記載的制造方法，其中，陣列狀的各吸附用表面的尺寸為在一個吸附用表面上可以附著一個動物細胞的尺寸。

[4]?[1]～[3]中任意一項記載的制造方法，其中，上述基板選自非導電性的有機材料和無機材料。

[5]?[1]～[3]中任意一項記載的制造方法，其中，上述基板為玻璃、塑料或陶瓷。

[6]?[1]～[4]中任意一項記載的制造方法，其中，步驟(3)中的上述微弱電位在－0.4V～－0.2V或＋0.2V～＋0.5V(相對于Ag/AgCl(vs.Ag/AgCl))的范圍。

[7]?[2]～[6]中任意一項記載的制造方法，其中，步驟(4)中的動物細胞的培養在對上述電極施加－0.4V～－0.2V(相對于Ag/AgCl)范圍的電位、抑制動物細胞對于上述電極的附著的同時進行。

[8]?[2]～[6]中任意一項記載的制造方法，其中，步驟(4)中的動物細胞的培養以對上述電極施加正電位、在上述電極上附著動物細胞的方式進行，得到在吸附用表面及電極上附著有動物細胞的基板。

根據本發明，可以形成可以個別附著動物細胞的培養基板，若使用該培養基板則也可以將動物細胞分別逐個地配置在基板表面上。

附圖說明

[圖1]?表示實施例1中的電極制造順序的說明圖。

[圖2]?表示步驟(2)～(4)的說明圖。

[圖3]?表示使用FITC標記膠原蛋白?I作為細胞外基質蛋白質時的圖案電極表面的圖像。