[發明專利]具有經修飾的前原區域的蛋白酶

有效

• 申請號: 201080043790.1
• 申請日: 2010-04-15
• 公開（公告）號: CN102575242A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: A·比薩奇科;B·F·施密特
• 申請（專利權）人: 丹尼斯科美國公司
• 主分類號: C12N9/54
• 分類號: C12N9/54;C12N15/57;C07H21/04
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 黃革生;林柏楠

1.一種編碼經修飾的全長蛋白酶的分離的經修飾的多核苷酸，所述分離的經修飾的多核苷酸包含編碼所述全長蛋白酶的前原區域的第一多核苷酸，該第一多核苷酸有效連接到編碼所述全長蛋白酶的成熟區域的第二多核苷酸上，其中所述第一多核苷酸編碼SEQ?ID?NO：7的前原區域，并進一步被突變而包含至少一個突變，其中所述至少一個突變增強宿主細胞的所述蛋白酶生產。

2.權利要求1的分離的經修飾的多核苷酸，其中所述經修飾的全長蛋白酶為源自野生型或變體前體堿性絲氨酸蛋白酶的堿性絲氨酸蛋白酶。

3.權利要求2的分離的經修飾的多核苷酸，其中所述前體堿性絲氨酸蛋白酶為枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、短小芽孢桿菌或地衣芽孢桿菌的絲氨酸蛋白酶。

4.權利要求1的分離的多核苷酸，其中所述宿主細胞為芽孢桿菌屬物種宿主細胞。

5.權利要求4的分離的多核苷酸，其中所述芽孢桿菌屬物種宿主細胞為枯草芽孢桿菌宿主細胞。

6.權利要求1-5之任一的分離的經修飾的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸編碼與SEQ?ID?NO：9的蛋白酶具有至少約65％同一性的蛋白酶。

7.權利要求1-6之任一的分離的經修飾的多核苷酸，其中所述第二多核苷酸編碼SEQ?ID?NO：9的蛋白酶。

8.權利要求1-7之任一的分離的經修飾的多核苷酸，其中所述第一多核苷酸包含至少一個突變，所述至少一個突變編碼在選自以下的一個或多個位置上的至少一個取代：2，3，6，7，8，10，11，12，13，14，15，16，17，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，57，58，59，61，62，63，64，66，67，68，69，70，72，74，75，76，77，78，80，82，83，84，87，88，89，90，91，93，96，100和102，其中的位置通過與SEQ?ID?NO：7的前原多肽的氨基酸序列對應而進行編號。

9.權利要求1-8之任一的分離的經修飾的多核苷酸，其中所述第一多核苷酸包含至少一個突變，所述至少一個突變編碼選自以下的至少一個取代：X2F，N，P和Y；X3A，M，P和R；X6K和M；X7E；I8W；X10A，C，G，M和T；X11A，F和T；X12C，P，T；X13C，G和S；X14F；X15G，M，T和V；X16V；X17S；X19P和S；X20V；X21S；X22E；X23F，Q和W；X24G，T和V；X25A，D和W；X26C和H；X27A，F，H，P，T，V和Y；X28V；X29E，I，R，S和T；X30C；X31H，K，N，S，V和W；X32C，F，M，N，P，S和V；X33E，F，M，P和S；X34D，H，P和V；X35C，Q和S；X36C，D，L，N，S，W和Y；X37C，G，K和Q；X38F，Q，S和W；X39A，C，G，I，L，M，P，S，T和V；X45G和S；X46S；X47E和F；X48G，I，T，W和Y；X49A，C，E和I；X50D和Y；X51A和H；X52A，H，I和M；X53D，E，M，Q和T；X54F，G，H，I和S；X55D；X57E，N和R；X58A，C，E，F，G，K，R，S，T，W；X59E；X61A，F，I和R；X62A，F，G，H，N，S，T和V；X63A，C，E，F，G，N，Q，R和T；G64D，M，Q和S；X66E；X67G和L；X68C，D和R；X69Y；X70E，G，K，L，M，P，S和V；X72D和N；X74C和Y；X75G；X76V；X77E，V和Y；X78M，Q和V；X80D，L和N；X82C，D，P，Q，S和T；X83G和N；X84M；X87R；X88A，D，G，T和V；X89V；X90D和Q；X91A；X92E和S；X93G，N和S；X96G，N和T；X100Q；和X102T，其中的位置通過與SEQ?ID?NO：7所示FNA蛋白酶的前原多肽的氨基酸序列對應而進行編號。