[發明專利]生物發光體內評價的組合物和方法

有效

• 申請號: 201080041867.1
• 申請日: 2010-09-16
• 公開（公告）號: CN102575282A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: S·奧德菲爾德;D·安薩爾迪;R·辛格;N·張
• 申請（專利權）人: 卡鉗生命科學公司
• 主分類號: C12Q1/66
• 分類號: C12Q1/66;G01N21/76
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

相關申請的交叉參考

本申請要求2009年9月18日提交的美國臨時申請第61/276,989號的優先權，其通過引用全文納入本文。

技術領域

本公開涉及用于評估活體生物體中生物發光的試劑領域。具體地，本文所述的組合物和方法用于標準化含生物發光蛋白的生物體中觀察到的生物發光信號，采用熒光染料。

背景技術

攜帶產生光的蛋白編碼基因的轉基因動物中光的檢測是診斷、藥物發現和醫療中的有力工具，其可在活體動物中鑒定疾病路徑、檢測作用機制、評價藥物化合物的效力并監控引導候選物對疾病發展的影響。參見例如，美國專利號7,449,615；7,255,851；7,198,774；6,939,533；6,923,951；6,916,462；6,908,605；6,890,515；6,649,143；6,217,847；和5,650,135。

在生物發光蛋白的情況中，底物通常在評價前給予所述動物。例如，在ATP存在下熒光素酶(如真核luc基因編碼的)催化D-熒光素(D-(-)-2-(6’-羥基-2’苯并硫唑基)噻唑啉-4-羧酸)的氧化以產生光信號。所述底物的可利用性顯示影響光子發射效率。參見例如Lee等.(2003)Nuclear?Medicine?Communications?24：1003-1009；Berger等.(2008)Eur.J.Nuclear?Medicine?and?Mol.Imaging?35(12)：2275-2285。已制備熒光素的各種衍生物，包括其中熒光素共價結合靶向部分(參見例如美國專利號4,665,022)或熒光標記(參見例如獲自普洛麥格公司(Promega)的5-氟熒光素)以及6-取代D-熒光素酯的制劑用于評價殺蟲劑(參見例如美國專利號5,374,534)。

盡管生物發光成像技術廣泛使用，但仍需要改良的檢測、定量和驗證活體動物生物發光的方法。

發明內容

本發明通過提供與給予所述動物的生物發光底物共分布的示蹤染料，包括評價和確定活體動物中生物發光的組合物和方法。

因此，在一個方面，本文所述的組合物含生物發光底物和示蹤染料。在某些實施方式中，所述生物發光底物包含熒光素且所述示蹤染料包含熒光染料。

另一方面，本發明描述了對含生物發光蛋白的活體動物中檢測的生物發光信號標準化的方法，通過將本文所述含生物發光底物(如熒光素)和示蹤染料(如熒光示蹤染料)的組合物給予動物、檢測所述生物發光底物和蛋白的反應產生的生物發光信號、檢測所述示蹤染料的信號(如熒光)并將所述生物發光信號相對所述示蹤染料的信號標準化。所述標準化可包括發現平均熒光信號并檢測個體動物中的熒光信號與平均熒光信號的偏差。若所述偏差大于設定量(如大于或小于平均30％)，則所述動物可重新成像。在某些實施方式中，通過下示一個或多個公式(1)、(2)和(3)來完成所述標準化。在某些實施方式中，通過計算機程序(如軟件)完成標準化。

在另一個方面，本文描述了驗證生物發光底物(如熒光素)是否通過血流注入活體動物的方法，通過將本文所述含生物發光底物(如熒光素)和示蹤染料(如熒光示蹤染料)的組合物給予所述動物，定位所述示蹤染料發出的信號，其中若所述示蹤染料信號定位在注射位置，則所述生物發光底物不通過所述血流分布。

在另一方面，本文提供含用于進行本文所述方法的任何本文所述組合物的試劑盒。在某些實施方式中，所述試劑盒獨立或在同一容器中含生物發光底物和示蹤染料。所述試劑盒還可包括有關試劑重建、將試劑注射入活體動物和/或成像、標準化和驗證方案的說明。

根據本文的公開內容，本領域技術人員容易理解這些及其他實施方式。

附圖簡要說明

圖1是注射熒光素/熒光染料制劑的小鼠中生物發光的概圖。感興趣區域(ROI)的生物發光用圓圈標注。

圖2的圖A和B描述注射熒光素/染料制劑的小鼠中熒光的背面觀(圖2A)和腹面觀(圖2B)。感興趣區域(ROI)的熒光用圓圈標注。

圖3顯示注射熒光素/染料制劑的動物中的生物發光(上圖，BLI標記)和熒光(下圖，FLI標記)。動物編號示于圖上方。

圖4顯示所示個體動物中與所述平均熒光(FLI)信號的改變百分比。

圖5顯示用熒光(FLI)信號標準化的生物發光(BLI)。

發明詳述