[發明專利]經改造的間充質干細胞和用其治療腫瘤的方法

有效

• 申請號: 201080026333.1
• 申請日: 2010-04-13
• 公開（公告）號: CN102695517A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 彼得·納爾遜
• 申請（專利權）人: 埃普塞斯有限責任兩合公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;C12N5/10;C12N5/0775
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 張文;王磊

在本申請全文中引用了多篇出版物。這些出版物的公開內容在本文中通過引用被并入到到本申請中，以對本發明所屬技術的狀態進行更全面的描述。

背景技術

一種新理論提出惡性細胞存在于顯著影響惡性表型的發生和維持的復雜的細胞和細胞外微環境中。^1，2可以發現實體瘤由惡性細胞和包含基質的支持細胞構成，所述包含基質的細胞包括成纖維細胞、內皮、周細胞、淋巴和通常的單核浸潤。^2-6這些基質細胞對腫瘤存活的重要性使其成為化學治療性干預的重要靶標。

間充質干細胞(MSC)是幫助多種組織維持和再生的多能祖細胞^7，8。可以在如骨髓、血液或不同來源的間充質組織的許多組織中發現MSC，它們在其中作為干細胞的局部來源。MSC有助于損傷后或慢性炎癥期間的組織重構。認為受損的組織釋放特定的內分泌物，而后這些內分泌物調動多潛能MSC并隨后使其匯集至損傷部位。MSC也被腫瘤基質強烈吸引。融合到實驗動物血液中的MSC定位至惡性腫瘤。一旦定位，MSC可以形成包括腫瘤血管和基質成纖維細胞的包含腫瘤基質的多種細胞類型。

近期Karnoub等指出，在乳腺癌中，腫瘤部位的MSC釋放一種小蛋白質，趨化因子CCL5。CCL5可作為多種基質細胞的化學引誘劑^9-10并且其表達與增強的腫瘤新生血管生成相關。此外，CCL5可通過將多種基質細胞類型匯集至原發腫瘤生長部位來幫助癌的生長和轉移。^9，11，12

近期發現MSC祖細胞的CD34^-亞群被匯集至正在生長的腫瘤并通過分化為新血管內皮細胞(EC)或周細胞來幫助腫瘤的新血管生成。^13-15重要的是，在將MSC直接注射入外周循環后可以觀察到這些和相關的直接影響。¹⁶

存在對這樣的基于干細胞的療法的未滿足需求：使用基于對細胞毒性蛋白表達而言與腫瘤間質組織本身的接近的細胞毒性蛋白表達，而不是基于與正在血管發生的腫瘤組織的接近的細胞毒性蛋白表達。對于還沒有經歷血管生成的轉移性腫瘤的治療，此需求尤為急切。

發明內容

本發明的一個實施方案提供用于治療患腫瘤的對象的方法，包括向所述對象的血流中引入治療有效量的遺傳修飾的間充質干細胞，其中每個遺傳修飾的間充質干細胞包含外源核酸，所述外源核酸包含(i)細胞毒性蛋白編碼區，其可操作性地連接至(ii)啟動子或啟動子/增強子組合，據此在所述遺傳修飾的間充質干細胞與腫瘤的間質組織接近時選擇性地表達所述細胞毒性蛋白。

本發明的另一實施方案還提供用于本專利申請中公開的任何治療患腫瘤對象的方法的遺傳修飾間充質干細胞。

本發明還提供用于治療患胰腺腫瘤的人對象的方法，包括向所述對象的血流中引入約1×10⁵至約1×10⁹細胞/kg體重的遺傳修飾的CD34^-干細胞，其中(a)每個遺傳修飾的CD34^-干細胞包含外源核酸，所述外源核酸包含(i)單純皰疹病毒胸苷激酶編碼區，其可操作性地連接至(ii)RANTES啟動子，(b)以允許單純皰疹病毒胸苷激酶致使更昔洛韋成為細胞毒性的方式用更昔洛韋治療所述對象，以及(c)在所述遺傳修飾的間充質干細胞的引入之后、同時或之前沒有髓抑制(myeloablation)。

本發明還提供包含外源核酸的遺傳修飾的間充質干細胞，所述外源核酸包含(i)細胞毒性蛋白編碼區，其可操作性地連接至(ii)啟動子或啟動子/增強子組合，據此在所述遺傳修飾的間充質干細胞與腫瘤的間質組織接近時選擇性地表達所述細胞毒性蛋白。

本發明的另一實施方案涉及逆轉錄病毒包裝細胞，所述逆轉錄病毒包裝細胞包含：

-逆轉錄病毒載體，所述逆轉錄病毒載體包含(i)細胞毒性蛋白編碼區，所述細胞毒性蛋白編碼區可操作性地連接至(ii)可由炎癥介質誘導的啟動子或啟動子/增強子組合；以及

-編碼病毒表面蛋白的基因，所述病毒表面蛋白為間充質干細胞或CD34^-干細胞提供趨向性。

此外所述逆轉錄病毒包裝細胞還包含編碼結構蛋白質的基因和用于從包裝細胞生成假病毒粒子的酶。

最后，本發明提供包含外源核酸的遺傳修飾的人CD34^-干細胞，所述外源核酸包含(i)單純皰疹病毒胸苷激酶編碼區，其可操作性地連接至(ii)RANTES啟動子。

附圖說明

圖1