[發(fā)明專利]篩選抑制目標(biāo)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的候選新藥以開發(fā)一類藥物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080023581.0
• 申請(qǐng)日: 2010-05-28
• 公開（公告）號(hào): CN102449476A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金邵妍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東國(guó)大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)
• 主分類號(hào): G01N33/15
• 分類號(hào): G01N33/15;G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 北京律誠(chéng)同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國(guó);鐘強(qiáng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種篩選抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的物質(zhì)的方法，更具體地涉及一種篩選抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的方法，所述方法包括使用一種蛋白質(zhì)芯片，該芯片上固定有包含溶膠-凝膠材料與蛋白質(zhì)的混合物的位點(diǎn)。

背景技術(shù)

眾所周知，開發(fā)低分子量的抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的抑制劑存在許多問(wèn)題，但由于它們的重要性，人們不斷嘗試著開發(fā)低分子量的可抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的物質(zhì)，并且已經(jīng)報(bào)道了幾個(gè)成功的實(shí)例(Nature?Reviews?Drug?Discovery，3：853，2004)。開發(fā)新藥的方法通常包括構(gòu)建特定的分析系統(tǒng)和使用該分析系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)十到數(shù)百萬(wàn)個(gè)化合物文庫(kù)的高通量篩選。這些方法主要用于跨國(guó)制藥公司，由于待分析的化合物數(shù)量或高速篩選系統(tǒng)的構(gòu)建等的各種限制，它們難以應(yīng)用于小型實(shí)驗(yàn)室。為了構(gòu)建一種新的用于篩選相對(duì)小型的數(shù)萬(wàn)個(gè)化合物文庫(kù)(如天然物質(zhì)文庫(kù))的高通量篩選系統(tǒng)，有必要在短時(shí)間內(nèi)以低成本驗(yàn)證這一概念。此外，對(duì)于學(xué)校和研究所等小型和中型實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，需要的策略是用新概念的分析系統(tǒng)和篩選系統(tǒng)來(lái)獲得先導(dǎo)化合物。

因此，需要用先前的由廉價(jià)聚合物構(gòu)建而成的芯片系統(tǒng)來(lái)建立新的藥物篩選方法，其適合基于芯片的篩選，可用于數(shù)量少的樣品，從而確保原創(chuàng)技術(shù)。這將有助于加強(qiáng)新藥開發(fā)行業(yè)的基礎(chǔ)建設(shè)。

相應(yīng)地，本發(fā)明人廣泛致力于基于芯片的用于篩選蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的抑制劑的方法，該方法甚至可有利地用于基于實(shí)驗(yàn)室的小型實(shí)驗(yàn)。結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)使用點(diǎn)樣帶有溶膠-凝膠材料與蛋白質(zhì)混合物的芯片，用現(xiàn)有的抗體分析方法很容易篩選出蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的抑制劑，從而完成本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種基于芯片的篩選抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的物質(zhì)的方法，其中蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用可用簡(jiǎn)便易行的方式分析。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種篩選抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的物質(zhì)的方法，所述方法包括步驟：(a)制造蛋白質(zhì)芯片，所述蛋白質(zhì)芯片上固定有包含溶膠-凝膠材料與蛋白質(zhì)的混合物的位點(diǎn)；(b)在存在抑制蛋白質(zhì)之間結(jié)合的候選物質(zhì)的情況下，使所述蛋白質(zhì)芯片與能和所述芯片上固定的蛋白質(zhì)相結(jié)合的蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)；和(c)測(cè)量所述芯片上固定的蛋白質(zhì)與能和所述固定的蛋白質(zhì)相結(jié)合的蛋白質(zhì)之間的結(jié)合，如果與不存在所述候選物質(zhì)的情況下相比，測(cè)得蛋白質(zhì)之間的結(jié)合受到抑制，則選擇所述候選物質(zhì)作為抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的物質(zhì)。

從以下詳細(xì)說(shuō)明及所附權(quán)利要求將更明確本發(fā)明的其他特點(diǎn)和實(shí)施方式。

附圖說(shuō)明

圖1顯示細(xì)胞周期蛋白T(Cyclin?T)之間的結(jié)構(gòu)同源性。

圖2顯示用于檢測(cè)重組CDK9和CyclinT在E.coli?BL21中的表達(dá)而進(jìn)行的SDS-PAGE的結(jié)果。

圖3顯示重組人CDK9的表達(dá)模式及其純化工藝。

圖4顯示重組人CyclinT的表達(dá)模式及其純化工藝。

圖5是顯示測(cè)定在溶膠-凝膠芯片上CDK9和人CyclinT1之間相互作用的方法示意圖。

圖6顯示在溶膠-凝膠芯片上蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合的分析結(jié)果。

圖7顯示在溶膠-凝膠芯片上用4種天然物質(zhì)進(jìn)行初步測(cè)試的結(jié)果。

圖8顯示在溶膠-凝膠芯片上進(jìn)行測(cè)試以確立分析條件的結(jié)果。

圖9顯示依賴于溶膠-凝膠材料組分的分析結(jié)果。

圖10顯示依賴于溶膠-凝膠材料的組分的分析結(jié)果。

圖11顯示天然物質(zhì)文庫(kù)對(duì)抑制CKD9和人CyclinT1間相互作用所產(chǎn)生的影響的分析結(jié)果。

圖12顯示依賴于溶膠-凝膠材料的組分的BSA信號(hào)的分析結(jié)果。

圖13顯示依賴于溶膠-凝膠材料的組分的BSA信號(hào)的分析結(jié)果。

圖14顯示構(gòu)建用于分析抑制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的天然物質(zhì)篩選系統(tǒng)的工藝。

圖15顯示在低密度芯片上3種天然物質(zhì)對(duì)抑制CDK9和人CyclinT1間相互作用所產(chǎn)生的影響的分析結(jié)果。

圖16是顯示CyclinT1和CDK9間相互作用機(jī)制的示意圖。

圖17是顯示SELEX方法構(gòu)建CyclinT1適體的示意圖。

圖18是顯示CyclinT1適體的作用機(jī)制的示意圖。

圖19顯示在溶膠-凝膠芯片上適體和CyclinT1間結(jié)合的分析結(jié)果。

具體實(shí)施方式