[發明專利]革蘭氏陽性細菌全細胞分析方法

無效

• 申請號: 201080022002.0
• 申請日: 2010-05-20
• 公開（公告）號: CN102439178A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 何恩瑞克·斯戴恩德;詹·純諾夫斯凱;利薩·L·科利馬斯;安妮·K·I·拉斯繆森
• 申請（專利權）人: 阿德萬德克斯公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.方法，包括：

a)將包含細菌的樣品與針對染色體DNA的、針對mRNA的和/或針對天然質粒的標記探針接觸，所述標記探針能確定與選定的性狀相關的染色體DNA、mRNA和/或質粒核酸，所述樣品中選定的革蘭氏陽性細菌和/或其它細菌可以具有所述選定的性狀。

b)確定所述樣品中具有所述選定性狀的細菌；

其中，

i)所述方法在全細胞上實施，并且ii)所述針對染色體DNA的、針對mRNA的和/或針對天然質粒的標記探針中的每一種都用單一標簽或兩種標簽進行標記。

2.如權利要求1所述的方法，還包括將所述樣品與能確定所述樣品中選定的革蘭氏陽性細菌的針對細菌的探針接觸，并確定所述樣品中一種或多種所述選定的革蘭氏陽性細菌。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中僅用針對mRNA的標記探針實施步驟(a)。

4.如權利要求3所述的方法，其中用針對mRNA的標記探針的混合物實施所述方法。

5.如權利要求1或2所述的方法，其中在不對所述針對染色體DNA的、針對mRNA的和/或針對天然質粒的標記探針的標簽進行信號擴增的條件下實施所述方法。

6.如權利要求2-5中任一項所述的方法，其中所述針對細菌的探針是針對rRNA的。

7.如權利要求2-5中任一項所述的方法，其中所述針對細菌的探針是基于抗體的。

8.如權利要求2-5中任一項所述的方法，其中所述針對細菌的探針是針對mRNA的。

9.如權利要求2-8中任一項所述的方法，其中所述針對細菌的探針是用標簽標記的。

10.如權利要求9所述的方法，其中每種針對細菌的探針都是用單一標簽或兩種標簽標記的。

11.如權利要求2-10中任一項所述的方法，還包括確定所述樣品中也具有所述選定性狀的選定革蘭氏陽性細菌。

12.如權利要求1-11中任一項所述的方法，還包括在進行步驟(a)之前，將所述樣品與mRNA誘導劑接觸。

13.如權利要求1-12中任一項所述的方法，其中所有的標簽都是熒光標簽，并且所述方法是熒光原位雜交(FISH)分析。

14.如權利要求1-13中任一項所述的方法，其中不進行預雜交步驟。

15.如權利要求1-14中任一項所述的方法，還包括在進行步驟(a)之前，用RNA酶抑制劑處理所述樣品。

16.如權利要求1-15中任一項所述的方法，其中所述選定的性狀與1)抗生素抗性、2)毒素產生和/或3)毒力相關。

17.如權利要求16所述的方法，其中通過確定分別具有以下基因的細菌來確定所述選定的性狀：1)mecA基因或vanA或vanB基因、2)tcdB基因和/或3)lukF或lukS基因。

18.如權利要求1-17中任一項所述的方法，其中在不將所述樣品與細胞透化劑接觸的條件下實施所述方法。

19.如權利要求1-18中任一項所述的方法，其中所述方法還包括將所述樣品與以下接觸：1)能確定所述樣品中第二選定的革蘭氏陽性細菌的第二針對細菌的探針，和/或2)能確定與第二選定的性狀相關的染色體DNA、mRNA和/或質粒核酸的第二針對染色體DNA的、針對mRNA的和/或針對天然質粒的標記探針，所述第二選定的性狀可存在于所述樣品的任何細菌內。

20.如權利要求1-19中任一項所述的方法，其中直接確定所述針對染色體DNA的、針對mRNA的和/或針對天然質粒的標記探針的標簽。

21.如權利要求1-2和5-20中任一項所述的方法，其中所述針對染色體DNA的、針對mRNA的和/或針對天然質粒的標記探針是PNA。

22.如權利要求1-2和5-21中任一項所述的方法，其中所述針對染色體DNA的、針對mRNA的和/或針對天然質粒的標記探針的長度為10至20個核堿基子單元。