[發明專利]正常新鮮的血小板的模擬物

有效

• 申請號: 201080010222.1
• 申請日: 2010-01-11
• 公開（公告）號: CN102341701A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 富蘭克林·J·卡弗;洛林·格拉涅爾
• 申請（專利權）人: 伯樂實驗室公司
• 主分類號: G01N31/00
• 分類號: G01N31/00
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

發明背景

本發明涉及的領域為血液學裝置的參考和對照材料，尤其涉及用作自動化血小板計數的對照的模擬人血小板。

自動化血細胞分析儀為血液樣品中存在的不同類型的細胞中的每一種提供細胞計數，其工作是通過測量每一細胞類型的電學和/或光學性質來實現的。這些性質包括電阻抗、電導性、射頻調節、光散射和光吸收的不同組合。多種分析儀都可以買到并用在臨床實驗室中，各種分析儀在收集和處理數據的方式上有所不同。

聯邦法規要求定期用對照來檢查血細胞分析儀以確保分析儀的可靠性。所述對照是合成的懸浮液，其具有與血液相似的某些物理和化學性質，并且包含尺寸和形狀與人血液中存在的不同細胞十分接近的穩定的細胞或顆粒。遺憾的是，不同裝置中的不同方法以不同的方式與對照發生反應，并且作為具體裝置的一種細胞的有效替代物的某些對照顆粒類型已被發現似乎與不同裝置的另一類型細胞或甚至細胞碎片類似。

在對照中必需提供的人血液的各種細胞類型中，血小板帶來最多問題。實際的血小板不適宜在對照中使用，因為當血小板懸浮于的血液離開血管系統時，血小板會破裂，并且該破裂能釋放促凝血酶原激酶，促凝血酶原激酶能引起凝血。此外，血小板易被活化且易聚集。而且它們的價格昂貴。由于這些原因，開發出了模擬血小板，它們價格便宜且沒有這些不利特征。模擬血小板通常是生物學細胞或非生物學顆粒。當使用生物學細胞時，它們是經修飾具有下述性質的非血小板細胞：這些細胞能用與實際血小板相同的參數進行檢測，并且因而可與其它細胞類型相區別。當使用顆粒時，它們是具有這些性質的顆粒。所述性質因檢測方法而異。在某些情況下，區別特征是尺寸范圍和尺寸分布，而在其它情況下，區別特征是化學內容物，例如與紅細胞中存在血紅蛋白相比缺少血紅蛋白。為了使對照能在不同類型的裝置而非僅僅一種裝置中使用，重要的是無論使用什么樣的裝置方法都能將模擬血小板組分檢測為血小板。遺憾的是，并非情況總是這樣，即便測量的性質是尺寸分布時，即，對于具體的對照，通過一種檢測方式具有一種尺寸分布而通過不同的檢測方式具有另一種尺寸分布并非罕見。新鮮的人血小板具有對數正態尺寸分布而非高斯分布，并且依賴顆粒尺寸的檢測裝置也必需具有對數正態分布的對照或具有可以接受接近對數正態尺寸分布的群體的計算機算法。

缺乏人血小板的破裂和聚集性質的實際的人血小板的相對便宜的替代物是來自非人脊椎動物的紅細胞。為了使這些細胞能作為模擬血小板使用，縮小細胞的尺寸并用固定劑處理而使細胞膜硬化。山羊是作為血小板替代物的紅細胞的良好來源，因為可對山羊紅細胞進行改變或者混合，使其與人血小板的尺寸及尺寸分布相似。調整尺寸的一種方法是將細胞懸浮在高滲溶液中，從而利用滲透壓將細胞液從細胞壓出。可在使用滲透壓之前或之后進行固定處理，這取決于是否將固定處理用作施加滲透壓時控制或限制細胞液通過速率的手段。

當進行固定處理來控制液體通過細胞膜的速率時，其目的是實現需要的顆粒尺寸范圍和尺寸分布。然而，即使能達到通過光學技術所檢測的特定顆粒尺寸范圍和分布，但是通過電學技術檢測時的尺寸范圍和分布未必相同。2001年4月16日發布的美國專利第5,008,201號(Ryan，W.L.(Streck?Laboratories，Inc.))公開了改正該缺陷的一種方法。該方法涉及通過以下方式制備梯度系列的顆粒尺寸：將不同細胞群體進行不同程度的固定，從而使每一細胞群體施加滲透壓時收縮不同的程度。然后，將細胞群體按照能共同接近期望的尺寸分布的比例混合。這方法的工作量較大，且易受所選的比例和不同處理程度中的標志的影響。

已經發現，可以從已經在尺寸上縮小并隨后進行了固定的非人脊椎動物紅細胞來制備血小板類似物，對于這種血小板類似物，通過光學測量所檢測到的尺寸范圍和分布與通過電學測量所檢測到的尺寸范圍和分布十分接近。該制備方法涉及首先將尺寸縮小并經過固定的細胞加熱到室溫以上并持續足以在細胞上產生變性效果的時間，然后優選在將細胞冷卻至室溫或接近室溫之前或之后，將細胞暴露于固定劑。在不需要單獨制備不同批的具有不同尺寸的細胞，并將各批細胞以仔細選擇的比例混合來形成接近所需尺寸分布的混合物的情況下，即可獲得該方法的有效結果。也可以對單批細胞進行該方法，并仍可以實現電學和光學測量方式所能檢測到的期望分布。這種制備方法使尺寸和分布特征更接近于能使收縮細胞作為評價實際人血小板的對照的尺寸和分布特征。