[發(fā)明專利]多價肺炎球菌莢膜多糖結(jié)合疫苗及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010624063.6
• 申請日: 2010-12-31
• 公開（公告）號: CN102068690A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 任濤;魏文進;唐秀麗;曹欣;胡鵬;郝倩;張美香;張明華;韓菲;何佳琦;王婷婷
• 申請（專利權(quán)）人: 北京民海生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/09
• 分類號: A61K39/09;A61K47/48;A61P31/04
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種多價肺炎球菌莢膜多糖結(jié)合疫苗及其制備方法。

背景技術(shù)

在過去的兩個世紀，沒有幾種傳染性病原體在全球的發(fā)病率和死亡率可與肺炎鏈球菌相匹敵，每年導致全球1百萬5歲以下兒童死亡。肺炎鏈球菌仍然是社區(qū)獲得性肺炎的主要原因，在成人中主要引起大葉性肺炎，在兒童中常引發(fā)細菌性肺炎、腦膜炎、中耳炎、胸膜炎等疾病。在沒有抗生素之前，有70％以上因肺炎菌血癥住院的病人死亡。嬰幼兒的20％-48％的急性中耳炎和50％的化膿性中耳炎是由肺炎鏈球菌引起的，菌血癥感染會引起較高的死亡率。據(jù)估計肺炎鏈球菌性肺炎在成人的發(fā)病率每年為0.1-0.47％，病死率為11％。我國肺炎發(fā)病率一直很高，近40多年來，其菌血癥死亡率一直俳徊在25％-29％之間，院外獲得性肺炎中肺炎鏈球菌性肺炎可達46％-76％。針對肺炎鏈球菌的感染，多年來一直采用抗生素治療。但是現(xiàn)在耐藥菌株多達96％以上，且呈現(xiàn)多重耐藥性狀。因此發(fā)展疫苗以預防該菌引起的疾病是十分重要的。

已發(fā)現(xiàn)的肺炎鏈球菌有90多個血清型，是建立在莢膜抗原的微少差異及家兔免疫器官對莢膜化學成份之間的微小差異加以識別，并產(chǎn)生對每種抗原的特異性抗體基礎(chǔ)上來分型的。肺炎鏈球菌的莢膜抗原是迄今為止細菌性疫苗中抗原結(jié)構(gòu)最復雜的，其型特異性多糖是由許多重復結(jié)構(gòu)單元組成的大分子聚合體，構(gòu)成了一胸腺非依賴性抗原(thymus-independent，TI)的特性。莢膜多糖(Capsular?polysaccharide，CPS)即是細菌的毒性因子又是一種重要的保護性抗原。

用化學方法純化細菌的莢膜多糖制備組分疫苗是20世紀疫苗發(fā)展的重要成就之一，也是第二次疫苗革命的標志之一。在世界范圍內(nèi)廣泛使用的多糖疫苗如流行性腦膜炎球菌A、C、Y、W135等4價多糖疫苗，肺炎23價多糖疫苗，傷寒Vi多糖疫苗等。大量臨床試驗結(jié)果表明，接種多糖疫苗引起的副反應十分罕見，這些疫苗對于預防成人和大齡兒童的相應感染方面效果顯著。令人遺憾的是多糖疫苗在年幼兒童中產(chǎn)生的抗體親合力低，對嬰幼兒的效果有限或無效。將細菌莢膜多糖與蛋白載體通過化學方式結(jié)合可以解決這個缺點，可將多糖胸腺不依賴性抗原轉(zhuǎn)變?yōu)樾叵僖蕾囆钥乖瑥亩鴨覶輔助淋巴細胞產(chǎn)生一系列的免疫增強效應，并產(chǎn)生免疫記憶應答；1987年B型流感嗜血桿菌(Hib)結(jié)合疫苗的成功研制開創(chuàng)了結(jié)合疫苗發(fā)展史上的又一個立程碑，結(jié)合疫苗成為兒童疫苗研究中的一個熱點。之后國際市場上陸續(xù)出現(xiàn)了C群腦膜炎結(jié)合疫苗和7價、10價肺炎鏈球菌結(jié)合疫苗。其它各類莢膜型或含脂多糖細菌的結(jié)合疫苗也陸續(xù)進入II、III期臨床研究。

CTB為霍亂毒素的無毒亞單位，可以和大多數(shù)哺乳動物細胞膜上的神經(jīng)結(jié)苷脂(GM1)受體結(jié)合。CTB約為12kDa；編碼基因(ctxB)長375bp，編碼124個氨基酸，其中前21個氨基酸為信號肽序列(Yamamoto?et?al.，1995)。

CTB可作為免疫載體，因為其具有結(jié)合GM1的功能，可使與其融合的蛋白更易與消化道黏膜作用，進而引起一系列生理生化反應，產(chǎn)生更強的免疫效果。CTB還可以作為某些外源多肽的穩(wěn)定載體，當它與化學偶聯(lián)或基因融合的抗原同時進入體內(nèi)之后，會激起融合表位抗原的免疫原性，使機體產(chǎn)生強烈的免疫反應，有可能達到免疫保護作用(Gonzales?et?al.，1993)。

CTB可作為良好的蛋白半抗原和弱抗原的載體，同時還可以賦予半抗原免疫原性，增強弱抗原的免疫原性(Tochikubo?et?al.，1998；Wu?et?al.，1998)。

盡管新型抗生素不斷問世，現(xiàn)代護理水平不斷提高，但由肺炎鏈球菌感染造成的發(fā)病率和死亡率仍居高不下。發(fā)展中的肺炎鏈球菌結(jié)合疫苗能誘導功能增強的免疫應答，并誘導免疫記憶和持久的免疫保護，為保護侵襲性肺炎鏈球菌在高危人群中的感染提供了新的機會。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種多價肺炎球菌莢膜多糖結(jié)合疫苗及其制備方法和應用。

本發(fā)明提供的結(jié)合疫苗，包含分離純化的23種血清型肺炎球菌的莢膜多糖和載體蛋白的偶聯(lián)物，所述的23種血清型肺炎球菌的血清型為1、2、3、4、5、6B、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19F、19A、20、22F、23F和33F。

本發(fā)明提供的多價疫苗，還可包括佐劑，其中，所述的佐劑為含鋁鹽佐劑，優(yōu)選為氫氧化鋁、硫酸鋁或磷酸鋁，其中所述的鋁鹽佐劑的含量(以鋁含量計)優(yōu)選為0.2mg/ml疫苗。

其中，所述的莢膜多糖和載體蛋白的質(zhì)量比為0.2～3∶1。