[發明專利]一種表皮生長因子受體二聚化抗原肽

有效

• 申請號: 201010618851.4
• 申請日: 2010-12-31
• 公開（公告）號: CN102153644A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 李黃金;朱磊;吳梅芝
• 申請（專利權）人: 廣東藥學院
• 主分類號: C07K14/71
• 分類號: C07K14/71;C07K19/00;A61K39/00;A61P35/02
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明涉及治療性多肽疫苗和抗體藥物制備領域，具體涉及一種表皮生長因子受體二聚化抗原肽及其制備方法和抗體。

背景技術

靶向性藥物研發在改善惡性腫瘤藥物療效、降低毒副反應方面具有重大意義。表皮生長因子受體（Epidermal?growth?factor?receptor,?EGFr）家族（包括EGFr、HER2/ErbB-2、HER3/ErbB-3和HER4/ErbB-4等）在胚胎和正常組織的生長發育中起重要作用，但它們在一系列上皮癌，如非小細胞肺癌、乳腺癌、頭頸癌、膠質瘤、腎癌、宮頸癌和子宮內膜癌等腫瘤細胞中過度表達，并導致惡性腫瘤細胞的快速增殖、轉移、新血管形成、耐藥和抗凋亡，目前已成為最為熱門的腫瘤藥物靶分子之一。

EGFr類受體為跨膜糖蛋白，由胞外區、跨膜區和胞內區等三個區域組成，完整的受體分子胞外區含配體結合區，胞內區含有酪氨酸激酶活性區，二者是抗腫瘤藥物的主要靶向位點，而針對此二靶點的產品形式主要是抗胞外域的單克隆抗體（嵌合抗體或人源化抗體）和抑制酪氨酸激酶活性的小分子抑制劑。目前已有抗EGFr抗體（C225/Erbitux，嵌合抗體）、抗HER2抗體（Trastuzumab/Herceptin，人源化抗體）和小分子酪氨酸激酶抑制劑（ZD1839、OSI-774）等正式上市。單抗類產品其靶向性更強，毒副作用更小；另外，除了像酪氨酸激酶抑制劑那樣直接通過阻斷信號通路來毒殺腫瘤細胞外，抗體產品尚可利用ADCC（抗體依賴的細胞介導的細胞毒性）效應毒殺腫瘤細胞，綜合效果更理想。因此，單抗類產品比酪氨酸激酶抑制劑在新藥研發和臨床應用中更受青睞。

EGFr家族受體的表達上調在各類上皮癌細胞間存在多態性。不同的上皮癌類型、甚至同種不同亞型中表達上調的受體種類不同，約有30%左右過表達EGFr或ErbB-2，另有5%左右過表達ErbB-3，限制了此類抗體的抗瘤譜。另外，用藥前需要采用復雜的分子生物學和免疫學手段鑒定過表達的受體類型，因此在臨床上給用藥帶來了極大的麻煩。在EGFr家族受體介導的信號傳遞過程中，胞外信號分子（配體）與胞外配體結合區結合引起構象改變、并導致受體分子間的“二聚體化”，二聚體化進一步導致胞內酪氨酸激酶區的激活，從而激發下游信號的傳導，產生細胞增殖等系列生物學效應。二聚體化可在同種受體分子間或同一家族的異種受體分子間進行，分別形成同源二聚體或異源二聚體。HER2缺配體結合區，但其參與二聚體化的相應界面始終處于暴露狀態，因此無需配體誘導即可與本家族其它成員形成異源二聚體。HER3缺失胞內酪氨酸激酶區，可與其它成員形成異源二聚體來傳導信號。因此，“二聚體化”是EGFr家族信號傳導早期的關鍵步驟和共有事件。Pertuzumab和806是近年開發的新一代抗體產品，目前已處于III期臨床試驗階段。二者分別針對HER2和HER3的二聚體化界面區，前者對HER2過表達和非過表達的HER3陽性腫瘤細胞均具有顯著毒性，而后者對EGFr和HER3過表達腫瘤細胞均具有顯著殺傷活性，顯然，此類針對二聚化界面的抗體更具抗瘤廣譜性。由于EGFr是其受體家族中結構最完善、分布最廣泛的成員，且二聚體化界面所在序列為高度保守序列，因此有理由相信針對EGFr“二聚體化”界面的抗體可能更具抗腫瘤廣譜效應。

盡管單抗類產品在臨床上表現出了良好的療效，但該類產品主要是嵌合抗體或人源化抗體，需要大規模高密度細胞培養，工藝復雜，生產成本高。另外，抗體治療屬于被動免疫療法，因抗體分子量大、半衰期短，所以需要長期、大劑量重復給藥（每周一次，每次數百毫克），因此給患者帶來較大的安全風險（如目前已發現Herceptin可導致急性心肌損傷）和沉重的經濟負擔（年費用約5萬美元）。主動免疫治療可誘發體內針對腫瘤相關抗原（TAA）的體液免疫反應或T細胞免疫反應，且可形成免疫記憶性細胞，因此無需像被動免疫那樣的重復給藥。在理論上，TAA并非真正意義上的抗原，因為它們屬于自身抗原，人體對其具有免疫耐受性。但在腫瘤患者體內可檢測到TAA的特異抗體和T細胞免疫反應，以及EGF疫苗已正式上市等事實表明，通過外源TAA給藥有可能打破患者對TAA的免疫耐受，從而激發體液和細胞免疫反應。因此，開發針對EGFr類受體“二聚體化”界面的治療性多肽疫苗成為可能。