[發(fā)明專利]一種微量,快速和精確檢測人紅細胞抗原和血清中抗體的方法

無效

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• 申請日: 2010-12-31
• 公開（公告）號: CN102175877A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發(fā)明（設計）人: 胡當玉;周凝;周勝利
• 申請（專利權）人: 周勝利
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80;G01N33/577;G01N33/543
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技術領域

本發(fā)明涉及一種利用免疫血液學原理快速、準確地檢測人紅細胞血型抗原和血清中存在的抗體的方法，具體地說是一種微量，快速和精確檢測人紅細胞抗原和血清中抗體的方法。

背景技術

在1901年Kaul?Landsteiner證明，當人群之間相互輸血時，由于紅細胞的血型不同可以引起被輸血者有發(fā)燒，黃疸，他因此把血型分成A，B，和O型，而且在實際應用中也說明在血型之間相符的人群間輸血是不會有輸血反應的。1902年A.Decastrello和A.Sturli發(fā)現了AB血型。1940年由Levine和Stetson發(fā)現了Rh血型，這是根據紅細胞膜是否存在這種抗原而把血型分為Rh陽性(也稱為D+)為含有這種抗原，Rh陰性(也稱為D-)為不含有這種抗原。現在已經清楚，98％以上的中國人為Rh陽性，而白種人僅有70％為Rh陽性。

檢測紅細胞膜表面的抗原和血清中的抗體來自于血液免疫學的發(fā)展，隨著科學家可以分離這種抗體和抗原，并利用這些抗體和抗原去檢測相應紅細胞膜表面的抗原和血清中的抗體，從而現已明確在A型紅細胞抗原的人都有B型抗體在血漿里，B型紅細胞抗原的人都有A型抗體在血漿里，而O型紅細胞抗原的人都有A，B型抗體在血漿里，AB型紅細胞抗原的人都無A，B，抗體存在血漿里。

在1950年Watkins?and?Morgan(Nature?180：1038-1040，1957)首先分析了紅細胞膜的抗原結構并純化了許多抗原，發(fā)現了紅細胞膜表面含有更多的抗原系統，同時，利用這些已知的抗原也檢測出在血漿中存在著更多的抗體，而在1980年以后單克隆抗體的發(fā)明更進一步的加速了紅細胞抗原的發(fā)現和發(fā)展。許多紅細胞抗原的單克隆抗體的發(fā)現和生產，促進了更多抗原的發(fā)現也加速了這些抗原和抗體在臨床上的應用。

市場上可利用的單克隆或多克隆抗體大都用來測定紅細胞的表面抗原，像A，B和D，而常用的方法就是紅細胞凝聚實驗。即紅細胞抗原和相應，已知的抗體結合后會產生紅細胞聚集反應，這種方法稱為正向紅細胞配型，而采用相應，已知的紅細胞抗原和未知的抗體結合后產生紅細胞聚集反應，這種方法稱為反向紅細胞配型，為了更精確的配型，臨床上都同時采用這二種方法去檢測紅細胞血型。

在常規(guī)的紅細胞配型實驗中，待檢測紅細胞和已知抗體，或待檢測血清和已知紅細胞抗原，分別在玻璃片，試管，凝膠，檢查板混合，通常用于對A，B，O紅細胞抗原的測定，而對D型抗原則采用oomb’s方法，即在待檢測紅細胞和抗D抗原抗體混合以后，還需加抗人免疫球蛋白抗體，然后才會出現凝結反應，這也稱為間接紅細胞凝結實驗。

在1980年后興起的單克隆抗體技術，加速了這些抗原的鑒定和發(fā)展，由于這些抗體的精確反應以及來源穩(wěn)定，現在已經替代了大部分在臨床上應用的多克隆抗體，但其價格上也比多克隆抗體為貴。應用玻璃片的方法簡單，快速，但消耗試劑多而且不是很精確；消耗時間，效率低下；試管方法精確，但費時，費試劑，效率低，結果不能保存；凝膠方法精確，結果能保存，但費時，費試劑，效率低；檢查板方法結果能保存，快速，可以方便自動化操作，效率高但費試劑，結果不能保存，操作麻煩，無直觀性而且有時會出現誤差，而需人工復查。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的及所要解決的技術問題是提供一種微量，快速和精確檢測人紅細胞抗原和血清中抗體的方法。該方法指明了檢測人紅細胞抗原和血清中抗體的保存反應結果及供以后復查的途徑，并指出了在提高和保證了血液制品的安全應用的前提下制備成各種各樣的紅細胞配型微量板提供給臨床應用的途徑。

為此，本發(fā)明解決所述問題的技術方案是：一種微量，快速和精確檢測人體紅細胞抗原和血清中抗體的方法，包括如下步驟：選微型配型板步驟，其板型為30，60，72或其它孔微型配型板，用以測定紅細胞抗原和血清抗體；