[發明專利]馬爾堡，埃博拉雙重病毒熒光定量PCR檢測新方法及該雙重病毒檢測PCR體系

有效

• 申請號: 201010605539.1
• 申請日: 2010-12-24
• 公開（公告）號: CN102140533A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發明（設計）人: 楊宇;王靜;白琳;胡孔新;徐寶梁
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京中創陽光知識產權代理有限責任公司 11003
• 代理人: 尹振啟

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及馬爾堡、埃博拉雙重病毒的快速定性和定量檢測方法，各提供一對特異性引物和探針。

背景技術

馬爾堡病毒(Marburg?virus，MbV)，也稱為綠猴病病毒、綠猴因子，是人類發現的第1種絲狀病毒屬病毒，能在人和其他靈長類動物中引發高死亡率的出血熱，馬爾堡出血熱起病突然，常伴有嚴重頭痛和不舒服，肌肉酸痛是一個常見特征，潛伏期一般為3～9日，較長者可超過2周，可被用作潛在的生物恐怖武器或生物戰劑使用，為需要實行最高級生物安全防護(P4級)的烈性病毒。WTO發出警報稱，“馬爾堡病毒是迄今為止最具有致命性的病毒之一。”

埃博拉病毒(Ebola?virus，EBOV)能夠引起一種人畜共患傳染病，即埃博拉出血熱(Ebola?hemorrhagil?fever，EBHF)，1976年在蘇丹南部和扎伊爾即現在的剛果(金)的埃博拉河地區首次爆發，患者死亡率高達90％，引起醫學界的廣泛關注，埃博拉病毒由此得名。埃博拉病毒感染性極強，可通過直接接觸感染者的體液或其他感染組織、皮膚潰破傷口和飛沫等多種途徑傳播。感染者會出現嚴重的出血現象并導致休克綜合征。世界衛生組織已經將EBOV列為對人類危害最嚴重的病毒之一，即第4級病毒，與其相關的試驗操作必須在P4級實驗室中進行。

埃博拉病毒和馬爾堡病毒共同組成了絲狀病毒屬。兩種病毒在基因排序和復制機理方面有廣泛的同源性，但從基因水平上卻代表兩種截然不同的病毒，二者不存在血清學交叉反應，在結構蛋白圖譜和病毒毒粒形態上具有明顯的不同。同時檢測馬爾堡、埃博拉兩種絲狀病毒將為疫情監測節約更多時間，節省更多成本。目前用于馬爾堡及埃博拉病毒的檢測方法已經有ELISA抗原檢測、間接免疫熒光血清學檢測、病毒分離、RT-PCR核酸檢測，但熒光定量PCR核酸檢測的方法不失為公認的一種更直觀、更快速的一種適合早期診斷的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種馬爾堡，埃博拉雙重病毒熒光定量PCR檢測新方法及該雙重病毒檢測PCR體系，該方法能夠快速定性和定量檢測馬爾堡病毒，埃博拉病毒，包括2對特異性更高、靈敏度高、重復性好的引物和探針。

為實現上述目的，本發明馬爾堡，埃博拉雙重病毒熒光定量PCR檢測新方法，該方法中：

1)設計檢測馬爾堡病毒的第一對引物探針為：

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