[發(fā)明專利]一種快速分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的試劑盒及方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010569165.2
• 申請(qǐng)日: 2010-11-26
• 公開（公告）號(hào): CN102041243A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊仕明;秦賀;趙立東;翟所強(qiáng);郭維維;孫建和;楊偉炎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 北京律誠(chéng)同業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006
• 代理人: 祁建國(guó);梁揮

1.一種分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的試劑盒，包括：

洗滌液，其為磷酸鹽緩沖液；

培養(yǎng)液A，其為α-MEM液體培養(yǎng)基；

培養(yǎng)液B，其為胎牛血清，以及

細(xì)胞消化液，其為胰蛋白酶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述洗滌液、培養(yǎng)液A、培養(yǎng)液B以及細(xì)胞消化液是無菌的。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述洗滌液、培養(yǎng)液A、培養(yǎng)液B以及細(xì)胞消化液是獨(dú)立包裝。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞源自哺乳動(dòng)物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述培養(yǎng)液B的技術(shù)指標(biāo)如下：滲透壓(240～340mOsmol/kg)、pH(7.0～7.5)、總蛋白含量(3～3.5/100ml)、血紅蛋白(≤20mg/100ml)。

6.權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述培養(yǎng)液A與培養(yǎng)液B以9∶1的體積比來提供。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述磷酸鹽緩沖液為0.01M，所述細(xì)胞消化液為質(zhì)量/體積百分比濃度0.25％的胰蛋白酶液。

8.一種分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，包括：

(1)利用洗滌液沖洗骨髓腔得到細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)混合液培養(yǎng)獲得原代培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；

(2)利用洗滌液沖洗步驟1)獲得的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，隨后用細(xì)胞消化液消化，經(jīng)傳代培養(yǎng)獲得傳代培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；和

(3)利用細(xì)胞消化液對(duì)步驟2)獲得的傳代培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行消化，獲得分離的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，

其中洗滌液為磷酸鹽緩沖液；

細(xì)胞培養(yǎng)混合液為按照9∶1體積比來配制的培養(yǎng)液A與培養(yǎng)液B，其中培養(yǎng)液A為α-MEM液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)液B為胎牛血清；以及

細(xì)胞消化液胰蛋白酶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中在步驟(1)中，采用24小時(shí)半量更換細(xì)胞培養(yǎng)混合液。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中在步驟(2)中，傳代培養(yǎng)使細(xì)胞密度達(dá)到90％。