[發明專利]一種溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法

有效

• 申請號: 201010567727.X
• 申請日: 2010-11-30
• 公開（公告）號: CN102021158A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發明（設計）人: 沈紹傳;贠軍賢;姚克儉
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;俞慧

1.一種溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，包括如下步驟：

(1)用pH值6.0～10.5的緩沖溶液稀釋含有溶菌酶的混合液得到上樣液，以0.1～25cm/min的流速上晶膠床柱，進行吸附；

(2)以去離子水或pH值6.0～10.5的緩沖溶液為沖洗液，沖洗掉晶膠內未被吸附的雜質；

(3)用含有0.02～3M堿金屬鹽的pH值6.0～10.5的緩沖溶液為洗脫液，進行洗脫，收集含溶菌酶的洗脫峰，得到所述的溶菌酶。

2.如權利要求1所述的溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，其特征在于步驟(1)中所述的含有溶菌酶的混合液為雞蛋清或預處理后的雞蛋清；所述的預處理后的雞蛋清是指先用0.1～1M的鹽酸溶液將蛋清的pH調至6.0-7.0，離心后將其上清液的pH用0.1～1M的氫氧化鈉溶液調至7.0～10.0范圍，再次離心后的上清液。

3.如權利要求1所述的溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，其特征在于所述晶膠床柱中的晶膠介質為陽離子交換型，其功能基團為磺酸基。

4.如權利要求1所述的溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，其特征在于步驟(2)中所述沖洗液的流速在0.1～25cm/min。

5.如權利要求1所述的溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，其特征在于步驟(3)中的洗脫為梯度洗脫，洗脫液流速0.2～20cm/min，先用含堿金屬鹽0.02～0.15M的pH值6.0～10.5的緩沖溶液進行洗脫，再用堿金屬鹽含量相應更高的pH值6.0～10.5的緩沖溶液進行洗脫，收集含溶菌酶的洗脫峰，得到所述的溶菌酶。

6.如權利要求1所述的溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，其特征在于所述的堿金屬鹽為NaCl或KCl。

7.如權利要求1所述的溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，其特征在于所述的緩沖溶液選自下列之一：①pH?6.0～8.0磷酸鹽緩沖溶液、②pH?7.1～9.0Tris-鹽酸緩沖溶液、③pH?9.1～10.5碳酸鹽緩沖溶液。

8.如權利要求1～7之一所述的溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，其特征在于依次用0.1M?HCl、1～2M?NaCl和去離子水對步驟(3)使用過的晶膠床柱進行再生。

9.如權利要求1所述的溶菌酶的晶膠吸附層析分離方法，其特征在于所述方法按照如下步驟進行：

(a)以pH值6.0～10.5的緩沖溶液平衡晶膠床柱；所述晶膠床柱中的晶膠介質為陽離子交換型，其功能基團為磺酸基；

(b)用pH值6.0～10.5的緩沖溶液稀釋雞蛋清或預處理后的雞蛋清得到上樣液，以0.1～25cm/min的流速上晶膠床柱，進行吸附；

(c)以去離子水或pH值6.0～10.5的緩沖溶液為沖洗液，以0.1～25cm/min的流速沖洗掉晶膠內未被吸附的雜質；

(d)用含有0.02～3M堿金屬鹽的pH值6.0～10.5的緩沖溶液為洗脫液，進行梯度洗脫，先用含堿金屬鹽0.02～0.15M的pH值6.0～10.5的緩沖溶液進行洗脫，再用堿金屬鹽含量相應更高的pH值6.0～10.5的緩沖溶液進行洗脫，洗脫液流速0.2～20cm/min，收集含溶菌酶的洗脫峰，得到所述的溶菌酶；所述的堿金屬鹽為NaCl或KCl；

(e)依次用0.1M?HCl、1～2M?NaCl和去離子水對晶膠床柱進行再生。