[發(fā)明專利]一種枯草菌脂肽鈉的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010566490.3
• 申請日: 2010-11-29
• 公開（公告）號: CN102061327A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫文;貢國鴻;范吉峰;王媚;李君君;劉潔;劉梅;丁仕奇
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽帝元生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/04
• 分類號: C12P21/04;C12R1/125
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;李玉秋

1.一種枯草菌脂肽鈉的制備方法，包括：

步驟1：取保藏編號為CGMCC?No.1107的枯草芽孢桿菌E8接種斜面培養(yǎng)基31～35℃培養(yǎng)48～72h，4℃保藏2～15d，所述斜面培養(yǎng)基配方為：牛肉膏2～8g/L、蛋白胨5～15g/L、氯化鈉2～8g/L、瓊脂粉10～25g/L；

步驟2：取斜面保藏菌落接種于種瓶培養(yǎng)基，31～35℃培養(yǎng)20～28h，所述種瓶培養(yǎng)基配方為：葡萄糖15～25g/L、L-谷氨酸2～10g/L、磷酸二氫鉀0.5～2g/L、酵母提取物0.5～3g/L；

步驟3：取種瓶培養(yǎng)物接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，31～37℃、150～350rmp培養(yǎng)24～72h，期間用1～3mol/L氫氧化鈉溶液控制發(fā)酵液pH值大于6.8，所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖或麥芽糖30～50g/L、可溶性淀粉或糊精30～50g/L、L-谷氨酸鈉15～25g/L、磷酸二氫鉀0.5～2g/L、酵母提取物0.5～3g/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟2所述接種的接種量為每50mL種瓶培養(yǎng)基接種0.1～0.5cm²斜面保藏菌落。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述制備方法，其特征在于，步驟3所述種瓶培養(yǎng)物接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1.0～1.9％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，還包括對步驟3所得發(fā)酵液進(jìn)行分離純化。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述制備方法，其特征在于，所述分離純化包括：

步驟I：枯草菌脂肽鈉發(fā)酵液預(yù)處理制備枯草菌脂肽鈉粗提物；

步驟II：溶解枯草菌脂肽鈉粗提物，過濾收集濾液；

步驟III：調(diào)節(jié)濾液pH值沉淀蛋白，收集上清液；

步驟IV：步驟III所得上清液加入沉淀劑，收集沉淀，所述沉淀劑為氯化鈉、磷酸鈉鹽、脂肪氨鹽酸鹽、烷磺酸鈉、烷基酚醛樹脂-聚氧丙烯聚氧乙烯醚、聚甲基苯基硅油-聚氧丙烯聚氧乙烯醚或超高分子聚氧丙烯聚氧乙烯醚；

步驟V：步驟IV所得沉淀用1～3mol/L氫氧化鈉溶液溶解，調(diào)pH值至6～7，結(jié)晶、干燥得枯草菌肽鈉成品。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備方法，其特征在于，步驟I所述發(fā)酵液預(yù)處理為發(fā)酵液過濾除菌體，調(diào)節(jié)pH值至2～5，0～8℃靜置12～20h以上，收集沉淀，干燥得枯草菌脂肽鈉粗提物。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備方法，其特征在于，步驟II所述溶解枯草菌脂肽鈉粗提物為加入溶解劑溶解，所述溶解劑為醇類、脂類或烷類，所述溶解劑加入量為每1g枯草菌脂肽鈉粗提物加入溶解劑5～30mL。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備方法，其特征在于，步驟III所述調(diào)節(jié)濾液pH值沉淀蛋白為濾液先調(diào)節(jié)pH值至6.5～7.0，然后離心取濾液調(diào)節(jié)pH值至3.5～5.5，離心。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備方法，其特征在于，還包括層析純化步驟。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述制備方法，其特征在于，所述層析純化為用吸附樹脂或離子交換樹脂層析純化。