[發(fā)明專(zhuān)利]表達(dá)高致病性禽流感病毒H5亞型血凝素蛋白的重組嗜酸乳桿菌

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010544665.0
• 申請(qǐng)日: 2010-11-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101985630A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊倩;王志勝;庾慶華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/74
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/74;C12N15/44;C12N15/66;C12N1/21;C12R1/23
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1.高致病性禽流感病毒H5亞型血凝素蛋白的重組表達(dá)質(zhì)粒，是由以下方法構(gòu)建而成：

(1)高致病性禽流感病毒H5亞型血凝素HA1，其序列為SEQ?ID?NO.1；乳酸脫氫酶LDH的啟動(dòng)子基因P，其序列為SEQ?ID?NO.4，其克隆過(guò)程如下：

設(shè)計(jì)啟動(dòng)子引物P1、P2：

P1?5’-TAAGGTACCTACTGAGAAGTTGCTC-3’

P2?5’-TAACTCGAGGCCGACGAGGATAACT-3’

5’端分別引入KpnI和XhoI限制性?xún)?nèi)切酶酶切位點(diǎn)，TAA為保護(hù)堿基，以質(zhì)粒pRV85為模板，常規(guī)PCR克隆乳酸脫氫酶啟動(dòng)子P；

設(shè)計(jì)高致病性禽流感病毒血凝素HA1引物HAF1、HAR2：

HAF1?5’-TAACTCGAGAAAATGGAGAAAATAGTGCTTC-3’

HAR2?5’-TAAGATATCCTACAATCTGAACTCACAAATT-3’

5’端分別引入XhoI和EcoRV限制性?xún)?nèi)切酶酶切位點(diǎn)，TAA為保護(hù)堿基，以質(zhì)粒pCI-H₅HA為模板，常規(guī)PCR克隆高致病性禽流感血凝素基因HA1；

(2)重組表達(dá)質(zhì)粒pLEM415-PHA1的構(gòu)建

利用酶切連接技術(shù)，分別將乳酸脫氫酶啟動(dòng)子P和高致病性禽流感血凝素HA1目的片段連接在大腸-乳酸桿菌穿梭質(zhì)粒pLEM415上，得到重組表達(dá)質(zhì)粒pLEM415-PHA1；采用限制性?xún)?nèi)切酶KpnI、XhoI、EcoRV，分別用雙酶切驗(yàn)證。

2.用權(quán)利要求1所述重組表達(dá)質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化獲得的表達(dá)高致病性禽流感病毒H5亞型血凝素蛋白的重組嗜酸乳桿菌，該重組嗜酸乳桿菌4356菌株，屬于嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)。