[發(fā)明專利]由復(fù)合MSC的PLGA/TCP和MSC組成的制劑及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010541010.8
• 申請日: 2010-11-08
• 公開（公告）號: CN101991880A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛寧;孔維霞;張毅;李紅;朱恒;江小霞;劉元林;吳英
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: A61L27/54
• 分類號: A61L27/54;A61L27/18;A61L27/38;A61K35/12;A61P37/06
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及由復(fù)合MSC的PLGA/TCP和MSC組成的制劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

由疾病、創(chuàng)傷所致的骨、軟骨缺損是臨床常見且較難醫(yī)治的病癥，而各種原因造成的關(guān)節(jié)軟骨缺損以及因自身缺乏有效的修復(fù)能力，造成損傷后常引起疼痛和關(guān)節(jié)功能障礙等。間充質(zhì)干細(xì)胞為骨缺損的治療提供了廣闊的前景。

間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)來源廣泛，廣泛存在于全身結(jié)締組織和器官間質(zhì)中，具有自我更新和增殖能力，在適宜的微環(huán)境中具有多潛能分化特性。基于MSC具有易獲得、易培養(yǎng)、方便運(yùn)輸、低免疫原性、免疫調(diào)節(jié)特性、能在宿主體內(nèi)長期存活、易于外源基因轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染后外源基因可以穩(wěn)定表達(dá)等優(yōu)點(diǎn)，其已成為組織工程、細(xì)胞移植、基因治療及器官移植等領(lǐng)域的理想種子細(xì)胞。將MSC作為種子細(xì)胞與支架材料復(fù)合之后移植到創(chuàng)傷部位，被認(rèn)為是現(xiàn)今最好的修復(fù)骨缺損的方法之一。

支架材料不僅要具有臨床使用時(shí)所需要的理化性能，還必須具有生物安全性，組織相容性等基本特性，以保證其使用的安全性，聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三鈣聚合物(PLGA/TCP)為常用的生物材料。有大量研究報(bào)道表明，MSC與生物材料相復(fù)合，在體內(nèi)可以向成骨、軟骨組織分化。但是仍然存在一些不足，目前利用MSC來促進(jìn)組織工程骨的研究，基本上是自體細(xì)胞移植，從而產(chǎn)生了許多局限性：自體MSC來源有限；增加機(jī)體創(chuàng)傷；體外擴(kuò)增需要一定時(shí)間而難于應(yīng)用于急診手術(shù)等。MSC具有低免疫原性及免疫調(diào)節(jié)能力，提示MSC可用于異體移植，而異體MSC移植是否存在安全問題，其在體內(nèi)引起怎樣的免疫反應(yīng)變化等目前還沒有明確的結(jié)論。

國內(nèi)郝偉等應(yīng)用兔脂肪干細(xì)胞與PLGA/TCP復(fù)合，從而構(gòu)建成骨組織工程復(fù)合體，體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)2周，結(jié)果發(fā)現(xiàn)成骨分化成功。但是關(guān)于生物工程骨在體內(nèi)引起的免疫反應(yīng)還沒有報(bào)道，生物工程骨移植后成功率也是潛在的問題。并且，組織工程骨要在臨床推廣應(yīng)用也必須實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)、降低移植物成本，也要考慮異體細(xì)胞的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于減輕生物材料復(fù)合骨片異體移植免疫反應(yīng)的制劑。

本發(fā)明提供的用于減輕生物材料復(fù)合骨片異體移植免疫反應(yīng)的制劑的活性成分是如下單獨(dú)包裝的物質(zhì)1)和2)：

1)由間充質(zhì)干細(xì)胞和聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三鈣聚合物復(fù)合成的生物材料復(fù)合骨片；

2)離體的間充質(zhì)干細(xì)胞。

優(yōu)選地是物質(zhì)1)和2)中的間充質(zhì)干細(xì)胞是相同來源的。

物質(zhì)1)中，所述生物材料復(fù)合骨片的制備方法包括如下步驟：將所述間充質(zhì)干細(xì)胞滴加到所述聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三鈣聚合物上，在35℃-40℃和4-6％CO₂培養(yǎng)條件下培養(yǎng)1.5-3小時(shí)。

進(jìn)一步，上述培養(yǎng)條件是37℃和5％CO₂；培養(yǎng)時(shí)間為2小時(shí)。

上述間充質(zhì)干細(xì)胞與所述聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三鈣聚合物的配比是：長5mm、寬5mm、厚1-2mm的聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三鈣聚合物上復(fù)合10⁵-5×10^5個(gè)間充質(zhì)干細(xì)胞。

進(jìn)一步講，上述間充質(zhì)干細(xì)胞與所述PLGA/TCP的配比是：長5mm、寬5mm、厚1-2mm的聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三鈣聚合物上復(fù)合2×10⁵間充質(zhì)干細(xì)胞。

本發(fā)明的另一目的在于提供另一種用于減輕生物材料移植免疫反應(yīng)的制劑。

本發(fā)明提供的另一種用于減輕生物材料移植免疫反應(yīng)的制劑的活性成分是如下單獨(dú)包裝的物質(zhì)a)和b)：

a)聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三鈣聚合物；

b)離體的間充質(zhì)干細(xì)胞。

物質(zhì)a)中，所述聚乳酸聚乙醇酸/磷酸三鈣聚合物是長5mm、寬5mm、厚1-2mm。

實(shí)驗(yàn)證明：材料生物材料復(fù)合骨片異體皮下移植1周后，可以看到生物材料復(fù)合骨片移植體區(qū)域(M+T)與相應(yīng)的單純材料移植組(T)相比，并沒有減少炎性細(xì)胞浸潤，主要為淋巴細(xì)胞浸潤，而輸注MSC(M+T-C，T-C)后，發(fā)現(xiàn)降低了炎性細(xì)胞的浸潤；取移植后1周各組小鼠脾臟，做病理切片，HE染色分析，觀察到生物材料復(fù)合骨片移植體區(qū)域(M+T)以及單純材料移植組(T)的脾小結(jié)較大，較多，而輸注MSC(M+T-C，T-C；)后脾小結(jié)相應(yīng)減小和減少，MSC輸注降低了CD3⁺T淋巴細(xì)胞早期活化指標(biāo)CD69的比例。。由此可見，我們建立了一種間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈輸注來減輕生物材料或生物材料復(fù)合骨片異體移植所引起的免疫反應(yīng)的方法。

附圖說明

圖1為PLGA/TCP材料細(xì)胞接種率。