[發明專利]快速檢測單純皰疹病毒I型的熒光定量PCR試劑盒

有效

• 申請號: 201010533964.4
• 申請日: 2010-11-05
• 公開（公告）號: CN101979668A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 王業富;趙友云;唐景峰;王維旭
• 申請（專利權）人: 武漢百泰基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 黃瑞棠

技術領域

本發明涉及一種引起人類多種疾病病原體基因檢測技術，尤其涉及一種快速檢測單純皰疹病毒I型熒光定量PCR試劑盒，適用于單純皰疹病毒I型的定性定量檢測。

背景技術

單純皰疹病毒(Herpse?simplex?virus，HSV)是一類嚴重危害人類健康、引起人類多種疾病的常見病原體。HSV有HSV1和HSV2兩個亞型，兩個亞型的核苷酸同源性達50％，而感染方式和臨床表現卻不相同。

HSV1主要通過口腔分泌物的接觸而感染，人群感染率高達50～90％，最常見的感染部位是口腔和唇，可引起原發感染，且可造成潛伏感染和復發。HSV1原發感染常引起口咽部皰疹、皰疹性角膜結膜炎、腦炎和皮膚皰疹性濕疹等；HSV1潛伏感染位于三叉神經節和頸上神經節部位，潛伏病毒可被激活轉為增殖性感染，病毒沿感覺神經纖維軸索下行返回末梢，在局部上皮細胞內增殖，引起局部復發性皰疹。近年來隨著口-生殖器性行為的增多，HSV1導致的生殖器皰疹正日益增多。

因此，準確及時地診斷HSV1對指導臨床治療、評估疾病的發展和預后具有重大意義。

近年來發展起來的熒光定量PCR(Fluorescence?Quantitative?PCR，FQ-PCR)技術以其靈敏度高、速度快、特異性強等優點在基因表達水平分析(Incetigationof?HSV-1，HSV-2，CMV，HHV-6and?HHV-8DNA?BY?real-time?PCR?in?surgicalresection?materials?of?eplepsy?patients?with?mesial?temporal?lobesclerosis[J].Journal?of?the?Neurological?Sciences.2008，264：151-156；Assessment?of?bluetongue?viraemia?in?sheep?by?real-time?PCR?andcorrelation?with?viral?infectivity.[J].Journal?of?the?NeurologicalSciences，Available?online?10May?2010)和定量檢測(Quantitativecharacterization?of?cell?transduction?by?HSV-1amplicons?using?flowcytometry?and?real-time?PCR[J].Journal?of?the?Neurological?Sciences2009，159：160-166；Development?of?a?novel?TaqMan?real-time?PCR?assayfordetecting?rubella?virus?RNA.[J].Journal?of?the?NeurologicalSciences2010，168：267-271)等方面得到廣泛應用，并且已經成為當前病毒核酸定量的主要方法，國內目前已有關于丙肝、乙肝、淋球菌、支原體、衣原體、艾滋病和結核定量檢測的試劑盒上市。

臨床檢測上傳統的培養法和血清學方法具有靈敏度低、特異性差、假陽性、耗時費力等缺點；常規PCR法雖然有簡便、快速、靈敏的優勢，但是有不能精確定量和PCR后處理產生污染導致的假陽性等問題；因此焏待開發一種精確、靈敏、快速和無污染的臨床檢驗方法。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的缺點和不足，提供一種快速檢測單純皰疹病毒I型的熒光定量PCR試劑盒。

本發明采用以下技術方案：

一、PCR試劑盒

該試劑盒包括：DNA提取液、熒光定量PCR反應液、HSV1標準陽性模板PMD18-T-HSV1和陰性質控標準品；

1、DNA提取液

配制0.01M?PBS(28.94g?Na₂HPO₄·12H₂O，2.6g?KH₂PO₄·2H₂O加入1000ml超凈水混勻，調pH到7.4)；

2、熒光定量PCR反應液含有單純皰疹病毒I型特異性引物對和熒光探針，

1)單純皰疹病毒I型(HSV1)：

正向引物為5′-GACGCCATATCCACCACCTTC-3′，

反向引物為5′-TGATGTGCGTCGCGTTGTAC-3′；

2)熒光探針序列為5′-CCACCAACCTGACCGAGTACCCGC-3′，