[發明專利]艾迪注射制劑的檢測方法有效
| 申請號： | 201010531105.1 | 申請日： | 2007-11-19 |
| 公開（公告）號： | CN102000139A | 公開（公告）日： | 2011-04-06 |
| 發明（設計）人： | 竇啟玲;葉湘武;湯瓊 | 申請（專利權）人： | 貴州益佰制藥股份有限公司 |
| 主分類號： | A61K36/481 | 分類號： | A61K36/481;A61K9/08;A61K9/19;G01N21/78;G01N30/90;G01N30/02;G01N21/31;A61P35/00;A61K35/64 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 550008 貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 艾迪 注射 制劑 檢測 方法 | ||
1.一種艾迪注射制劑的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法為：
性狀：對于凍干粉針劑，產品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物；
對于輸液劑，產品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
對于水針劑，產品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
鑒別：
(1)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加乙醇攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-5次，將沉淀物用蒸餾水溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸，在二液面接界處顯紫紅色環；
(2)分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水溶解，加入預先制備好的DA-201樹脂柱上，用水洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數分鐘，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
檢查：
PH值：應為3.0-6.5；
重金屬：取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原：取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；
蛋白質：取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現渾濁；
鞣質：取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現渾濁或沉淀；
樹脂：取凍干粉針50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20-50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現沉淀；
草酸鹽：取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調節PH值至1-2，濾過，濾液調節PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現渾濁或沉淀；
鉀離子：取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應符合規定；
砷鹽：取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二；
溶血與凝聚：2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得；
供試品溶液的制備：取凍干粉針100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40-100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得；
試驗方法：取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時；
按上法檢查，以第3管為準，本品在3小時內不得出現溶血和紅細胞凝聚；
異常毒性：取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查；
過敏物質檢查：取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質檢查法檢查，應符合規定；
升壓物質檢查：取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質檢查法檢查，應符合規定；
降壓物質檢查：取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質檢查法檢查，應符合規定；
其他：應符合中國藥典注射劑項下有關的各項規定；
含量測定：
(1)人參皂苷Re
對照品溶液的制備：精密稱取人參皂苷Re對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得；
標準曲線的制備：精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液、高氯酸，搖勻，置水浴中加熱，取出，用水冷卻，加冰醋酸，搖勻，照中國藥典分光光度法，測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
供試品溶液的制備：分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水洗脫，棄去洗液，用40-90％乙醇洗脫，收集洗脫液于蒸發皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法：精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml；
(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統適用性試驗：以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低于1500；
對照品溶液的制備：取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿溶解，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備：分別取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液濃縮、或直接取水針劑，加入1-3mol/L硫酸溶液，用氯仿振搖提取1-5次，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容，即得；
測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
2.按照權利要求1所述艾迪注射制劑的檢測方法，其特征在于：具體的檢測方法為：性狀：對于凍干粉針劑，產品為淺黃色至淺棕色的疏松塊狀物；
對于輸液劑，產品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
對于水針劑，產品為淺黃色至淺棕色的澄明液體；
鑒別：
(1)取凍干粉針400-1000mg加注射用水5-20ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至5-20ml、或取水針劑20-100ml濃縮至5-20ml；分別取上述藥品，加乙醇20-100ml，攪勻，濾過，沉淀物用乙醇洗滌1-4次，將沉淀物用蒸餾水2-10ml溶解，取0.5-3ml置試管中，微熱后加入2-10％α-萘酚乙醇溶液2-10滴，搖勻，再沿管壁緩緩加入濃硫酸0.2-2m1，在二液面接界處顯紫紅色環；
(2)取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml；置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-4次，每次10-60ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水1-10ml溶解，加入預先制備好的DA-201樹脂柱上，內徑0.5～2cm，長10-20cm，填充10-15cm的DA-201樹脂后，再填充1-5g中性氧化鋁；用水50-200ml洗滌，再用20-80％甲醇液洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇0.5-5ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1、Rb及黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml各含0.5-3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005年版一部附錄薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3-20μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝1-10∶2-15∶1-10∶1-10，10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱數分鐘，置紫外光燈200-500nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
檢查：
PH值：應為3.0-6.5；
重金屬：取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；置坩堝中，水浴上蒸干，照中國藥典重金屬檢查法檢查，含重金屬不得過百萬分之五；
熱原：取凍干粉針300-600mg加注射用水30ml使溶解、或取輸液100-300ml濃縮至30ml、或取水針劑30ml；用氯化鈉注射液或5～10％葡萄糖注射液稀釋至100ml，按家兔體重1Kg注射10ml的劑量，照中國藥典熱原檢查法檢查，應符合規定；
蛋白質：取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的30％磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現渾濁；
鞣質：取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；加新配制的含1％雞蛋清的生理氯化鈉溶液5ml，必要時，用0.45um微孔濾膜濾過，放置10分鐘，不得出現渾濁或沉淀；
樹脂：取凍干粉針50-100mg加注射用水5ml使溶解、或取輸液20-50ml濃縮至5ml、或取水針劑5ml；加鹽酸1滴，放置30分鐘，不得出現沉淀；
草酸鹽：取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；用稀鹽酸調節PH值至1-2，濾過，濾液調節PH值至5-6，加3％氯化鈣溶液2-3滴，放置10分鐘，不得出現渾濁或沉淀；
鉀離子：取凍干粉針20-40mg加注射用水2ml使溶解、或取輸液8-20ml濃縮至2ml、或取水針劑2ml；蒸干，按照中國藥典鉀離子測定法測定，應符合規定；
砷鹽：取凍干粉針10-20mg加注射用水1ml使溶解、或取輸液4-10ml濃縮至1ml、或取水針劑1ml；精密量取，于坩堝中蒸干，加2％的硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500-600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典砷鹽檢查法檢查；每1ml成品中含砷量不得過百萬分之二；
溶血與凝聚：2％紅細胞混懸液的制備取兔血或羊血數毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2-3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得；
供試品溶液的制備：取凍干粉針100-200mg加注射用水10ml使溶解、或取輸液40-100ml濃縮至10ml、或取水針劑10ml；加生理氯化鈉溶液稀釋成50ml，混勻，即得；
試驗方法：取試管6支，按下表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻后，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的供試品溶液，第6管為對照管，搖勻后，置37℃±0.5℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時后，每隔1小時觀察一次，共觀察3小時；
按上法檢查，以第3管為準，本品在3小時內不得出現溶血和紅細胞凝聚；
異常毒性：取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；按小鼠每只0.5ml，照中國藥典異常毒性檢查法檢查；
過敏物質檢查：取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按豚鼠致敏劑量為0.5ml/只，激發劑量為1.0ml/只；照中國藥典過敏物質檢查法檢查，應符合規定；
升壓物質檢查：取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按大鼠體重1kg注射10ml的劑量，照中國藥典升壓物質檢查法檢查，應符合規定；
降壓物質檢查：取凍干粉針加注射用水使溶解、或取輸液、或取水針劑；以原藥濃度，按貓體重1kg注射1ml的劑量，照中國藥典降壓物質檢查法檢查，應符合規定；
其他：應符合中國藥典注射劑項下有關的各項規定；
含量測定：
(1)人參皂苷Re
對照品溶液的制備：精密稱取人參皂苷Re對照品，置量瓶中，加甲醇溶解使每1ml中含人參皂苷Re?1-2mg，搖勻，即得；
標準曲線的制備：精密量取對照品溶液0、20、40、60、80、100μl，分別置10ml具塞試管中，置水浴上揮去溶劑，立即取出，放冷，加2-10％香草醛冰醋酸溶液0.05-1ml、高氯酸0.5-1.5ml，搖勻，置40-80℃水浴中加熱8-25分鐘，取出，用水冷卻1-3分鐘，加冰醋酸2-10ml，搖勻，照中國藥典分光光度法，在400-700nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
供試品溶液的制備：取凍干粉針200-400mg加注射用水10-30ml使溶解、或取輸液50-200ml濃縮至10-30ml、或取水針劑10-30ml；分別精密量取上述藥品，置分液漏斗中，用氯仿提取1-5次，每次10-30ml，合并氯仿提取液，用蒸餾水洗滌1-4次，每次2-10ml，棄去氯仿液，洗液與上述水層合并，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取1-5次，每次40-60ml，合并正丁醇提取液，加入無水硫酸鈉1-5g，攪拌，放至澄清，將正丁醇液移至蒸發皿中，用少量正丁醇洗滌無水硫酸鈉，洗液并入蒸發皿中，蒸干，用少量蒸餾水溶解殘渣，加到大孔吸附樹脂DA-201柱上，待液面接近棉花層后，用蒸餾水100ml洗脫，控制流速為0.3-0.6ml/min，棄去洗液，用40-90％乙醇70-100ml洗脫，收集洗脫液于蒸發皿中，置水浴上蒸干，用甲醇溶解殘渣，移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
測定法：精密量取供試品溶液100μl，照標準曲線的制備項下的方法，自“置10ml具塞試管中”起依法測定吸收度；從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Re的重量μg，計算；該注射制劑中，凍干粉針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于1％；輸液劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.01mg/ml；水針劑中含人參以人參皂苷Re計，不得少于0.1mg/ml；
(2)斑蝥素照中國藥典氣相色譜法測定；
色譜條件與系統適用性試驗：以聚乙二醇20M及甲基硅橡膠SE-30為固定液，涂布濃度分別為5-20％和1-10％，0.5-2∶0.5-2混合裝柱；柱溫為180±10℃；理論板數按斑蝥素峰計算，應不低于1500；
對照品溶液的制備：取斑蝥素對照品，精密稱定，加氯仿制成每1ml含0.05-0.2mg的溶液，作為對照品溶液；
供試品溶液的制備：取凍干粉針400-1000mg加注射用水20-100ml使溶解、或取輸液200-500ml濃縮至20-100ml、或取水針劑20-100ml，加入1-3mol/L硫酸溶液2-10ml，用氯仿振搖提取1-5次，每次10-100ml，合并氯仿液，用K-D濃縮器濃縮定容至2-8ml，即得；測定法分別精密量取對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，計算，即得；該注射制劑中，凍干粉針劑中含斑蝥素為0.0005％-0.05％；輸液劑中含斑蝥素為0.00001-0.001mg/ml；水針劑中含斑蝥素為0.0001-0.005mg/ml。
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