[發明專利]一種淀粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法

有效

• 申請號: 201010522048.0
• 申請日: 2010-10-28
• 公開（公告）號: CN102042979A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 何保山;謝巖黎;金華麗;王金水;韓小賢
• 申請（專利權）人: 河南工業大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 鄭州科維專利代理有限公司 41102
• 代理人: 張欣棠;馬忠

技術領域

本發明涉及一種快速測定淀粉發酵液中葡萄糖含量的檢測技術，屬于糧食加工檢測領域。

背景技術

葡萄糖是最普通的、被人們所熟悉的單糖，又稱右旋糖，屬醇醛類。葡萄糖是生物體內新陳代謝不可缺少的營養物質，是人類生命活動所需能量的重要來源。在食品、醫藥工業上葡萄糖可直接使用，在印染制革工業中作還原劑，在制鏡工業和熱水瓶膽鍍銀工藝中常用葡萄糖作還原劑，工業上還用大量用葡萄糖為原料合成維生素C。微生物發酵生產中常以淀粉為基本原料，經水解生成還原糖或葡萄糖，供發酵使用，因此葡萄糖的檢測是淀粉發酵生產過程控制的常規生化指標。而目前的葡萄糖檢測現行國家專業標準及AOAC推薦方法中，均采用容量分析法，即斐林試劑滴定法和鐵氰化鉀滴定法。其中斐林試劑滴定法是利用斐林甲液、乙液混合時，生成的天藍色氫氧化銅沉淀立即與酒石酸鉀鈉起反應，生成深藍色的氫氧化銅和酒石酸鉀鈉的絡合物——酒石酸鉀鈉銅，酒石酸鉀鈉銅被葡萄糖還原，生成紅色的氧化亞銅沉淀，然后加入硫酸鐵，氧化亞銅被氧化為銅鹽，以高錳酸鉀溶液滴定氧化作用后生成的亞鐵鹽，根據高錳酸鉀消耗量，計算氧化亞銅含量，即可算出葡萄糖含量。雖然斐林試劑法沿用已久，但測定結果只是近似值，且操作過程異常復雜。和鐵氰化鉀滴定法一樣，這兩種方法都要求溶液在微沸狀態下滴定，滴定操作在電爐上進行，反應溫度不易控制，操作者對滴定終點的判斷帶有經驗性，干擾因素多，人為誤差較大，對葡萄糖的評價不夠準確，主觀影響因素較大，再者使用斐林溶液滴定葡萄糖時，其他具有還原能力的單糖會干擾檢測結果，造成較大的系統誤差。上述方法只適用于實驗室操作，檢測速度慢，難以滿足實際生產操作的需求。

發明內容

本發明的目的，就是針對上述測試方法的不足，向糧食加工行業提供一種具有檢測速度快、準確度高、抗干擾能力強、操作簡便等特點，且適用于現場應用的葡萄糖檢測技術，從而建立一種方便快捷的淀粉發酵液中葡萄糖含量的檢測方法。

為了達到上述目的，本發明是這樣實現的：取100μL檢測試樣與2400μL自制的葡萄糖光學檢測試劑混合，樣品中葡萄糖與檢測試劑起顯色反應，反應產物在380nm處有最大吸收峰，通過比較不同濃度葡萄糖標準樣品的Abs₃₈₀值，制定標準曲線，根據待測樣品的Abs₃₈₀值，獲取待測物中葡萄糖的含量，從而實現本發明的目的。

自制的葡萄糖光學檢測試劑由轉化酶、還原型染料、鹵化物鹽組合而成。轉化酶由過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖淀粉酶和β-葡萄糖苷酶中的至少一種或一種以上組成，過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖淀粉酶是轉化酶的優選，過氧化氫酶、己糖激酶和葡萄糖氧化酶是轉化酶的最優選，轉化酶待加入量的優選為10～100U。

還原型染料由淀粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉、草酸鈦鉀、苯酚、N，N二甲基苯胺和甲基酚中一種或一種以上組成，淀粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉、草酸鈦鉀、苯酚和N，N二甲基苯胺是還原型染料的優選，淀粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉和草酸鈦鉀是還原型染料的最優選，還原型染料待加入量的優選為100～200mM。

鹵化物鹽由氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉和碘化鉀中一種或一種以上組成，氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉和溴化鉀是鹵化物鹽的優選，氯化鈉和氯化鉀是鹵化物鹽的最優選，鹵化物鹽待加入量的優選為150～200mM。

該檢測方法具有特異性強、靈敏度高、易于操作、準確度高等特點，可以用于淀粉發酵液中葡萄糖的快速檢測。

附圖說明

圖1為與標準曲線比較判斷淀粉發酵液樣品中葡萄糖的含量的示意圖；

具體實施方式

本發明提供一種淀粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法，具體實施過程是：取100μL檢測試樣與2400μL自制的葡萄糖光學檢測試劑混合，樣品中葡萄糖與檢測試劑起顯色反應，反應產物在380nm處有最大吸收峰，通過比較不同濃度葡萄糖標準樣品的Abs₃₈₀值，制定標準曲線，根據待測樣品的Abs₃₈₀值，獲取待測物中葡萄糖的含量。

在本發明的自制葡萄糖光學檢測試劑中，所述檢測試劑是由轉化酶、還原型染料、鹵化物鹽組合而成。

所述轉化酶由過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖淀粉酶和β-葡萄糖苷酶中的至少一種或一種以上組成，過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖淀粉酶是轉化酶的優選，過氧化氫酶、己糖激酶和葡萄糖氧化酶是轉化酶的最優選。轉化酶加入量的優選為10～100U。