[發明專利]一種竹節香附素A的制備方法

無效

• 申請號: 201010520192.0
• 申請日: 2010-10-26
• 公開（公告）號: CN102010457A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 蘇劉花
• 申請（專利權）人: 南京澤朗農業發展有限公司
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00;C07H15/256;C07H1/08
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技術領域：

本發明屬于醫藥技術領域，公開了一種竹節香附素A的制備方法。?

背景技術：

竹節香附素A，為三萜苷類化合物。又名多被銀蓮花素A，紅背銀蓮花素A；英文名：Anemodeanin?A。?

竹節香附素A為白色粉末狀結晶，mp.242-244℃。?(c＝0.8，甲醇)。分子式為C₄₇H₇₆O₁₆，分子量為897.10。易溶于水、甲醇、乙醇，不溶于丙酮、乙酸乙酯等低極性溶劑。分子結構式為：?

竹節香附素A來源于毛茛科(Ranunculaceae)多被銀蓮花(竹節香附)Anemone?raddeanaRegel的根莖。產于東北地區及山東等地，以吉林省產量最大。該藥首載于明朝劉文泰所著《本草品匯精要》中，臨床上有“祛風除濕，消癰腫”的作用，用于“風寒濕痹、四肢拘攣、骨節疼痛、瘡癰潰爛”等癥。?

竹節香附素A是兩頭尖的主要有效成分之一，具有較強的生理活性。林小欽等將不同質量濃度的竹節香附素A與HepG2細胞共同培養，采用MTT比色法及細胞集落形成法檢測竹節香附素A對HepG2細胞生長、增殖的影響。結果竹節香附素A各劑量的作用與未處理組相比，在各時間點均有顯著差異，從而得到結論：竹節香附素A對HepG2細胞增殖有明顯抑制作用，在一定范圍內隨著試藥質量濃度的升高和作用時間的延長而增強。王明奎等用水解和溶劑萃取的方法從中藥兩頭尖中提取制備了待測總皂苷(銀蓮花素A占總苷的20％)，并研究了總皂苷的體外和體內的抑瘤活性，發現制備的兩頭尖總苷具有較好的抑制腫瘤生長的活性，是一個有?潛力的抗癌藥物。?

劉大有等已對兩頭尖進行了分離及結構鑒定，采用的為常壓硅膠柱法，但其采用正丁醇萃取再上大孔樹脂，正丁醇萃取率較低，保留成分損失較大。目前尚未有報道用半制備色譜對竹節香附素A進行分離純化的報道。因此為了對兩頭尖及其制劑進行質量控制，本發明采用常規大孔樹脂柱分離和高效液相色譜相結合的方法制備竹節香附素A。該方法操作簡單，產品純度高，可達98％以上。?

發明內容：

本發明的目的是提供一種竹節香附素A的制備方法，具體來說，是采用大孔樹脂和液相結合的方法制備竹節香附素。?

本發明所述的一種竹節香附素A的制備方法，其特征在于包含以下步驟：?

(1)提取：將兩頭尖粉碎，經乙醇提取、水提取后，趁熱過濾、合并提取液，減壓濃縮至無醇味；?

(2)萃取：將提取物用乙酸乙酯萃取，棄去萃取液；?

(3)柱層析：將水層上大孔樹脂柱吸附，丙酮-甲醇-水洗脫，分步收集，每份約500ml，合并竹節香附素A流分，低溫濃縮至有沉淀析出；?

(4)純化：將洗脫濃縮液靜置過夜，濾出沉淀，將沉淀物溶于乙醇溶液中，超聲溶解，用半制備型液相色譜純化，收集保留流分，減壓濃縮、結晶并干燥得到無色結晶。?

步驟(1)中所述乙醇濃度體積百分比為70-90％，提取兩次，水提一次，液料比為3-10∶1(V/W)。?

步驟(3)中所述大孔樹脂為HPD300、HPD450、NKA-9型大孔樹脂，所述洗脫條件為先用水洗至顏色變淺，然后改用丙酮-甲醇-水(55∶35∶10)洗脫。?

步驟(3)中所述低溫為0-10℃。?

步驟(4)中所述半制備型高效液相色譜條件為：ODS?C18，5μm，250*20.0mm(I.D.)，流動相組成體積比：甲醇-水(68∶32)，流速5.0ml/min，柱溫：室溫；檢測波長：UV?207nm；進樣量：50微升。?

本發明的積極效果為：本發明制備的竹節香附素A純度高、具有較強的抗癌活性，原料豐富易得，應用前景廣闊。?

分析型高效液相色譜條件：ODS?C18，5μm，250*4.5mm(I.D.)，流動相組成體積比：甲醇∶水(75∶25)，流速1.0ml/min，柱溫：室溫；檢測波長：UV?207nm；進樣量：10微升。?

下面將結合具體實施方式進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列?實施方式。?

具體實施方式：

實施例1：?