[發明專利]應用雙親性多孔中空碳微球制備固定化酶的方法

無效

• 申請號: 201010512346.1
• 申請日: 2010-10-12
• 公開（公告）號: CN102443579A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發明（設計）人: 楊森;孫運輝;倪德志;關政榮
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種制備固定化酶的方法，包括如下步驟：將雙親性中空碳微球和待固定酶的溶液混合，4-45℃反應0.5-24h，得到固定化酶；所述雙親性中空碳微球按照如下方法制備：在恒溫條件下，將酵母在水溶液或水中進行碳化，得到雙親性中空碳微球；所述恒溫的溫度為180-240℃之間的任一溫度。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述恒溫的時間為8-14小時。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述酵母為啤酒酵母(Saccharomyces?cerevisiae)；所述水溶液為己二醛水溶液、NaOH水溶液或HNO₃水溶液；所述酵母與所述水溶液的配比為10-200g酵母∶1L水溶液，優選為200g酵母∶1L水溶液。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于：所述己二醛水溶液為0.01mol/L己二醛水溶液；所述NaOH水溶液為1g/100mL?NaOH水溶液；所述HNO₃水溶液為1g/100mL?HNO₃水溶液。

5.如權利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述待固定酶為水解酶、氧化還原酶、脫氫酶或異構酶；所述水解酶為脂肪酶、β-葡萄糖苷酶、蛋白酶、淀粉酶或纖維素酶；所述氧化還原酶為過氧化氫酶或葡萄糖氧化酶；所述脫氫酶為乙醇脫氫酶；所述異構酶為葡萄糖異構酶。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述固定化酶為固定化脂肪酶；所述待固定酶的溶液由游離脂肪酶和0.02mol/L?pH6.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液組成，脂肪酶濃度為4mg/mL；所述雙親性中空碳微球與所述待固定酶的溶液的配比為0.05g∶2mL；所述反應的參數為：4-25℃，振蕩反應12h。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述固定化酶為固定化過氧化氫酶；所述待固定酶的溶液由游離過氧化氫酶和0.05mol/L?pH7.0的NaH₂PO₃-Na₂HPO₃緩沖液組成，過氧化氫酶濃度為20-50mg/mL；所述雙親性中空碳微球與所述待固定酶的溶液的配比為0.05g∶4mL；所述反應的參數為：4-25℃，振蕩反應0.5-24h。

8.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述固定化酶為固定化葡萄糖氧化酶；所述待固定酶的溶液由游離葡萄糖氧化酶和0.05mol/L?pH5.5的NaH₂PO₃-Na₂HPO₃緩沖液組成；葡萄糖氧化酶濃度為20mg/mL；所述雙親性中空碳微球與所述待固定酶的溶液的配比為0.05g∶2mL；所述反應的參數為：30℃，振蕩反應6h。

9.如權利要求5所述的方法，其特征在于：所述固定化酶為固定化β-葡萄糖苷酶；所述待固定酶的溶液由游離β-葡萄糖苷酶和0.05mol/L?pH4.8的HAc-NaAC緩沖液組成，β-葡萄糖苷酶濃度為1mg/mL；所述雙親性中空碳微球與所述待固定酶的溶液的配比為0.05g∶1mL；所述反應的參數為：45℃，振蕩反應2h。

10.權利要求1至9中任一所述方法制備得到的固定化酶。