[發明專利]一種植物耐高pH鹽堿基因SucHP及應用

無效

• 申請號: 201010508079.0
• 申請日: 2010-10-15
• 公開（公告）號: CN102002505A
• 公開（公告）日: 2011-04-06
• 發明（設計）人: 李海燕;劉亮;王南;王瑩
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/10;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00
• 代理公司: 長春市四環專利事務所 22103
• 代理人: 張鐵生

1.一種植物耐高pH鹽堿基因SucHP，其堿基序列如：SEQ?ID?No.1所示。

2.一種植物耐高pH鹽堿基因SucHP表達的蛋白，其氨基酸序列如序列表SEQ?ID?No.2所示。

3.根據權利要求1所述的一種植物耐高pH鹽堿基因SucHP，其特征在于，它是從堿蓬中分離出來的cDNA。

4.根據權利要求3所述的一種植物耐高pH鹽堿基因SucHP，其特征在于，它是由下述的方法獲得：

1)將堿蓬種子用升汞消毒后，播種于MS培養基中，3周后將幼苗轉移至水培系統，在水培系統中培養4周后用100mM?NaHCO₃+200mM?NaCl進行處理，處理24h后，采取整株植株，分離堿蓬總RNA；

2)采用磁珠法分離純化mRNA、利用Library?Construction?Kit試劑盒反轉錄，建立堿蓬cDNA文庫；利用PCR-Select^TM?cDNA?Subt?raction?Kit試劑盒抑制消減雜交構建SSH文庫；然后用在SSH文庫中已鑒定的堿蓬耐鹽堿關鍵基因，即質膜型H^--Ppase基因片段為探針，篩選堿蓬cDNA文庫，從而獲得上述基因的全長cDNA片段。

5.一種植物耐高pH鹽堿基因SucHP的制備方法：

1)提取堿蓬總RNA，采用磁珠法分離純化mRNA，反轉錄為cDNA，人工合成下述引物：

引物1：5′-AAAAAGCAGGCTATGAGTGGCATTCTTCTTC-3′

引物2：5′-AGAAAGCTGGGTTTAGAAGATCTTCAAGAGCA-3′

引物3：5′-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCT-3′

引物4：5′-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGT-3′

2)利用引物1和引物2，以堿蓬的總RNA反轉錄的cDNA為模板，進行第一輪PCR擴增、得到2295bp?SucHP基因片段；

3)以第一輪的PCR產物稀釋100倍為模板，使用引物3、引物4，進行第二輪PCR擴增，得到純化的2295bp?SucHP基因片段。

6.一種植物表達載體，其特征在于，它含有權利要求5所述的純化的SucHP基因片段。

7.一種植物耐高pH鹽堿基因SucHP，在轉基因植物中的應用。