[發(fā)明專利]野生茄子耐鹽基因StNHXl植物表達載體無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010501811.1 | 申請日： | 2010-10-11 |
| 公開（公告）號： | CN101955972A | 公開（公告）日： | 2011-01-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 朱月林;蓋鈞鎰;陳國戶;楊立飛 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N15/29;C12N15/66;A01H5/00 |
| 代理公司： | 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 張素卿 |
| 地址： | 21009*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 野生 茄子 基因 stnhxl 植物 表達 載體 | ||
1.野生茄子耐鹽基因StNHX1植物表達載體，其構(gòu)建方法為：
1)野生茄子‘Torvum?Vigor’中StNHX1耐鹽基因的克隆：
以野生茄子‘Torvum?Vigor’幼嫩葉片為材料，提取葉片總RNA，取2μg總RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA，設(shè)計引物在野生茄子‘Torvum?Vigor’葉片cDNA中擴增StNHX1基因：
上游引物F：5’-GCCGGATCCGCCACCATGGGGTTGGATG-3’
下游引物R：5’-CCCGAGCTCTCAATGACCACATCCTC-3’
將PCR產(chǎn)物連接到pMD19-T載體上，命名為pMD19-StNHX1，測序驗證；
2)StNHX1基因連接至pBI121質(zhì)粒：
BamH?I/Sac?I雙酶切質(zhì)粒pMD19-StNHX1回收StNHX1片段，同樣雙酶切pBI121質(zhì)粒回收pBI121-GUS-；將回收的兩片段用T4連接酶連接，命名為p121-GUS--StNHX1，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細胞；
3)StNHX1基因連接至pCAMBIA1301質(zhì)粒構(gòu)建植物表達載體：
HindIII/EcoR?I雙酶切pBI121-GUS--StNHX1回收35S?prom-StNHX1-NOS?term片段，同樣雙酶切pCAMBIA1301質(zhì)粒回收其大片段；將回收的兩片段用T4連接酶連接，命名為pCAMBIA1301-StNHX1，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細胞后進行PCR和酶切驗證，構(gòu)建成功。
2.權(quán)利要求1所述植物表達載體pCAMBIA1301-StNHX1在提高作物的耐鹽性方面的應(yīng)用。
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