[發(fā)明專利]一種微囊藻毒素MC-RR快速檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

無(wú)效

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• 申請(qǐng)日: 2010-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN102004149A
• 公開（公告）日: 2011-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張根義;趙春城;朱程琳;孫秀蘭;杜前明;鄭立功;陳波;單金蓮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 無(wú)錫百奧森科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N31/22
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種微囊藻毒素MC-RR的快速檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

微囊藻毒素（Microcystin，簡(jiǎn)稱MC）是藍(lán)藻產(chǎn)生的一類天然毒素。而科學(xué)家的研究表明，被微囊藻毒素污染的飲用水和水產(chǎn)品，給人類健康帶來(lái)了巨大威脅。微囊藻是一類卑微的生物，但它們有時(shí)會(huì)表現(xiàn)出超乎尋常的生命力。不論常規(guī)的自來(lái)水處理工藝，還是將水煮沸，都難以有效去除微囊藻毒素。研究顯示，即使在300攝氏度高溫下微囊藻毒素仍然可以保留一部分活性。?

微囊藻毒素在我國(guó)存在最普遍，含量相對(duì)較多的是MC-LR和MC-RR，其中L、R分別代表亮氨酸、精氨酸。微囊藻毒素MC-RR，是一類具生物活性的單環(huán)七肽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如式所示：?

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微囊藻毒素水華的頻繁暴發(fā)嚴(yán)重威脅著生態(tài)安全和人類的飲水安全，對(duì)水中微囊藻毒素及時(shí)準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)非常重要。目前對(duì)水體中微囊藻毒素檢測(cè)技術(shù)的研究開發(fā)非常活躍，主要有高效液相色譜（High?Performance?Liquid?Chromatography，HPLC）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Emzyme-Linkde?Immunosorbent?Assay，ELISA）以及蛋白磷酸酶酶抑制試驗(yàn)（Protein?Phosphatase?Inhibition?Assay，PPIA）等。

常規(guī)的理化檢測(cè)方法，特別是液相色譜和質(zhì)譜分析設(shè)備體積龐大、價(jià)格昂貴、需要環(huán)境條件較高的室內(nèi)環(huán)境、而且還需要專門的技術(shù)人員操作、前處理復(fù)雜、檢測(cè)費(fèi)用昂貴；并且由于微囊藻毒素異構(gòu)體眾多，且性質(zhì)近似，缺少相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品，成為微囊藻毒素大規(guī)模篩查的限制條件。而磷酸酶酶抑制試驗(yàn)雖然都能很好地檢測(cè)出毒素，但是存在靈敏度不高或檢測(cè)過(guò)程繁瑣，樣品能量小等不足。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)是基于抗原－抗體特異性反應(yīng)的分析方法，具有檢測(cè)特異性強(qiáng)、靈敏度高、分析能量大、檢測(cè)速度快、費(fèi)用低廉等優(yōu)點(diǎn)，而且能適應(yīng)大規(guī)模樣品的快速篩查和預(yù)警監(jiān)測(cè)而被人們所重視和采用。?

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-linked?immunosorbent?assay，?ELISA）是將酶的催化反應(yīng)與抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)結(jié)合起來(lái)的一種檢測(cè)技術(shù)。由于抗原、抗體反應(yīng)的高度專一性，加之酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，因此能使測(cè)定方法達(dá)到很高的特異性和靈敏度。ELISA方法作為體外診斷及科學(xué)研究的手段，集中了抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶促反應(yīng)的放大作用，理想的底物顯示信號(hào)使其結(jié)果的判讀更為客觀、簡(jiǎn)單和快捷。?

水中微囊藻毒素MC-RR的ELISA快速檢測(cè)試劑盒還未見有此類專利報(bào)道。本發(fā)明專利利用ELISA技術(shù)建立了檢測(cè)水中微囊藻毒素MC-RR的快速檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、使用方便、可以快速地檢測(cè)水中微囊藻毒素MC-RR的ELISA快速檢測(cè)試劑盒，以及這種試劑盒的檢測(cè)方法。?

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：用于檢測(cè)水中微囊藻毒素MC-RR的ELISA試劑盒的組成包括盒體，在盒體內(nèi)設(shè)有微囊藻毒素MC-RR酶標(biāo)物、微囊藻毒素MC-RR標(biāo)準(zhǔn)品、包被微囊藻毒素MC-RR抗體的酶標(biāo)板、酶標(biāo)物稀釋試劑、洗滌試劑、顯色試劑A、顯色試劑B、終止試劑、標(biāo)本稀釋試劑。?

本發(fā)明還提供一種水中微囊藻毒素MC-RR的ELISA檢測(cè)方法。?

本發(fā)明試劑盒的檢測(cè)原理為：?

一種微囊藻毒素MC-RR快速檢測(cè)試劑盒是直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。已知微囊藻毒素MC-RR濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。微囊藻毒素MC-RR標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的抗原競(jìng)爭(zhēng)性地與酶標(biāo)板上的微囊藻毒素MC-RR抗體結(jié)合。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入顯色試劑A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用，產(chǎn)生顏色，顏色的深淺和樣品中微囊藻毒素MC-RR的濃度呈比例關(guān)系。

本發(fā)明中檢測(cè)結(jié)果分析過(guò)程為：用所獲得的每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度平均值（B）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液（O標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B_O）再乘以100%，即百分吸光度值。計(jì)算公式為：?

百分吸光度值（%）＝（B/B_O）×100%

以微囊藻毒素MC-RR標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/L）值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用同樣的辦法計(jì)算樣品的百分吸光度值，相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度則可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本中微囊藻毒素MC-RR的含量。