[發明專利]一種胰島素和C肽雙標記測定試劑盒

無效

• 申請號: 201010296346.2
• 申請日: 2010-09-28
• 公開（公告）號: CN102419373A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發明（設計）人: 李明;湯永平;吳英松;徐偉文;朱坤
• 申請（專利權）人: 廣州市達瑞抗體工程技術有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用雙標記時間分辨免疫熒光分析技術同時進行胰島素和C肽定量測定的試劑盒，包括：校準品干血片、包被反應板、標記物、分析緩沖液、25x洗液和增強液，其中標記物含銪標記抗C肽抗體和釤標記胰島素抗體兩種標記物，其特征在于銪標記抗C肽抗體和釤標記胰島素抗體濃度分別為25μg/mL和50μg/mL，溶解基質組分為pH7.8的50mmol/lTris-HCl、3％BSA、0.1％Proclin300、3％海藻糖和0.84％NaCl。

2.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于銪標記抗C肽抗體和釤標記胰島素抗體的制備步驟分別為：

1)抗體純化和濃縮：選擇市售的抗C肽單克隆抗體和抗胰島素單克隆抗體，將1mg抗C肽單克隆抗體和1mg抗胰島素單克隆抗體加入pH?9.0的50mmol/L?Na₂CO₃?0.5ml，混勻后，用市售的帶有濾膜的G-50離心管10000rpm離心5min，再用pH?9.0的50mmol/LNa₂CO₃0.5ml重復洗滌6次，倒轉G-50離心管，1500rpm離心2min收集抗體，體積控制在150μl-250μl；

2)抗體標記：將純化的C肽抗體加入0.2mg?Eu³⁺標記試劑，純化的胰島素抗體加入0.5mgSm³⁺標記試劑，充分混勻，25℃振蕩過夜；

3)上樣與洗脫：用規格為1×30cm的Sephadex?G-50層析柱分離純化，含0.9％NaCl的50mmol/l?Tris-HCl洗脫，按1ml/管收集流出液，逐管測量A280nm，合并峰管，測蛋白含量；

4)稀釋標記物：并管后的銪和釤標記物，按1∶100的比例進行稀釋；

5)分裝標記物：分裝體積為1.0ml/瓶，真空冷凍干燥；

6)保存：凍干后在2℃-8℃條件下保存。

3.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于分析緩沖液組分為pH7.8的50mmol/LTris-HCl、1.5％PEG6000、0.2％BSA、0.1％Proclin300、0.02％牛IgG、0.1％Tween?20和0.84％NaCl。

4.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于校準品干血片由胰島素和C肽溶解在校準品基質中，并滴制在Whatman903^#濾紙上，其中校準品干血片根據胰島素和C肽濃度不同分別編號A-E，編號為A-E的校準品干血片加入胰島素和C肽的濃度分別為：

校準品基質由脫纖維綿羊全血，使用生理鹽水洗滌6次后，并采用生理鹽水調整紅細胞壓積至0.55，輕輕混勻制備而成。

5.根據權利要求1的試劑盒，其特征還在于試劑盒使用的標本類型為濾紙干血片。