[發(fā)明專利]Y-STR基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010295104.1
• 申請(qǐng)日: 2010-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN102433374A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜先華;邵武;陳初光;李軍;于蛟;劉鋒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧省刑事科學(xué)技術(shù)研究所;基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)(北京)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11333
• 代理人: 初向慶

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測人體基因組中具有多態(tài)性的遺傳標(biāo)記，特別是涉及Y染色體STR基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系及應(yīng)用。

背景技術(shù)

DNA多態(tài)性分析技術(shù)自1985年被應(yīng)用于法庭科學(xué)生物物證的個(gè)體識(shí)別和親子鑒定中以來，極大地推動(dòng)了法醫(yī)物證鑒定技術(shù)的發(fā)展，帶動(dòng)刑事技術(shù)產(chǎn)生了劃時(shí)代的突破。十幾年來，新的DNA多態(tài)性分析方法不斷涌現(xiàn)，開發(fā)了許多新的多態(tài)性理想的遺傳標(biāo)記，誕生了一系列的現(xiàn)代化DNA檢驗(yàn)技術(shù)。尤其是1992年開始出現(xiàn)的STR基因座檢驗(yàn)技術(shù)，因其多態(tài)性好、識(shí)別能力強(qiáng)、靈敏度高、易于自動(dòng)化等特點(diǎn)，迅速成為法醫(yī)DNA鑒定中的主流技術(shù)，得到了廣泛的應(yīng)用，取得了令人矚目的成果。但傳統(tǒng)的STR基因座檢驗(yàn)主要是以常染色體STR基因座作為檢測目標(biāo)，達(dá)到認(rèn)定罪犯的目的。而目前DNA鑒定已不再僅僅被應(yīng)用來直接認(rèn)定犯罪嫌疑人，更依靠它為整個(gè)的偵查工作提供方向和指導(dǎo)?，F(xiàn)實(shí)中很多案件在偵查過程中根據(jù)諸多線索可以判斷，罪犯就應(yīng)該是生活在一定范圍的村民或常住人員，在案發(fā)現(xiàn)場也找到了有價(jià)值的生物物證，但由于沒有明確的排查線索，只得對(duì)本地區(qū)大批量的可疑人員應(yīng)用DNA技術(shù)進(jìn)行排查，經(jīng)常有案件送檢當(dāng)?shù)叵右扇藙?dòng)則幾百人，排查工作量大、費(fèi)用高，更主要的是要花費(fèi)很長的時(shí)間，真正的犯罪嫌疑人可能在這樣的威懾下很快逃跑，不能充分發(fā)揮利用現(xiàn)代化技術(shù)手段指導(dǎo)偵查工作的時(shí)效性，喪失破獲案件、抓捕罪犯的最好時(shí)機(jī)。

隨著分子生物學(xué)、遺傳學(xué)的發(fā)展，尤其是伴隨著人類基因組計(jì)劃的完成，國內(nèi)外法庭科學(xué)工作者在人類Y染色體上發(fā)現(xiàn)同樣具有很多多態(tài)性理想的STR基因座，由于Y染色體為男性特有，而且Y染色體上的異染色質(zhì)區(qū)在減數(shù)分裂過程中不發(fā)生重組，而以單倍型在父系親屬中垂直傳遞，因而在許多案件中應(yīng)用具有獨(dú)特使用價(jià)值，成為法醫(yī)DNA領(lǐng)域新的研究和應(yīng)用熱點(diǎn)。

現(xiàn)有技術(shù)存在的問題：1、目前國內(nèi)針對(duì)Y-STR研究報(bào)道主要集中于新基因座的開發(fā)、群體遺傳學(xué)調(diào)查及部分方法研究，但主要是采用單基因座檢驗(yàn)、銀染色的檢測方法，還沒有一種熒光標(biāo)記的多基因座復(fù)合檢驗(yàn)的成品試劑盒。2、國外相關(guān)研究起步較早，研究相對(duì)深入，目前已經(jīng)推出Y-STR熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒，但是國外試劑盒所采用的Y-STR基因座是根據(jù)歐美人群的遺傳數(shù)據(jù)選擇的，在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)有部分基因座并不適合中國人群，而且價(jià)格昂貴。為此自主開發(fā)適合中國人群的Y-STR熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒，提高個(gè)體識(shí)別能力，降低檢驗(yàn)鑒定費(fèi)用，充分發(fā)揮Y-STR檢驗(yàn)在實(shí)際案件生物物證鑒定中作用是當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)中國人Y-STR基因座的特點(diǎn)，利用聚合酶鏈反應(yīng)在一個(gè)反應(yīng)中同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)短串聯(lián)重復(fù)基因座。本發(fā)明還涉及將該擴(kuò)增體系應(yīng)用于個(gè)人識(shí)別和親子鑒定中，其靈敏感度高，分型結(jié)果準(zhǔn)確，完全能夠滿足實(shí)際案件檢驗(yàn)的需要。

Y-STR基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系，該復(fù)合擴(kuò)增體系同時(shí)擴(kuò)增Y染色體上的10個(gè)基因座：DYS19、DYS389-1、DYS389-2、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS438、DYS439和DYA7.2。

上述擴(kuò)增體系中還包括一個(gè)性別鑒定基因座Amelogenin，該性別基因座作為該試劑盒進(jìn)行檢測的內(nèi)對(duì)照。

所述基因座分成三組，分別由三種不同顏色的熒光素標(biāo)記，三組組合分別為：Amelogenin+DYS19+DYS389-1+DYS389-2；DYS390+DYS391+DYS392+DYS393；DYS438+DYS439+DYA7.2。

所述Amelogenin+DYS19+DYS389-1+DYS389-2組為綠色JOE熒光素標(biāo)記，所述DYS390+DYS391+DYS392+DYS393組為藍(lán)色FAM熒光素標(biāo)記；所述DYS438+DYS439+DYA7.2組為黑色TAMRA熒光素標(biāo)記。

所述基因座由一對(duì)引物擴(kuò)增，其中一個(gè)引物的5’末端帶有熒光標(biāo)記。

所述引物對(duì)分別為：

Amelogenin引物：

引物1：AGAGCTTAAACTGGGAAGCTG，

引物2：ATGGCATGTAGTGAGGACA；

DYS19引物；

引物1：ATGGCATGTAGTGAGGACA，

引物2：CTACTGAGTTTCTGTTATAGT；

DYS389-1/2引物：

引物1：TCTTATCTCCACCCAGA，

引物2：CCAACTCTCATCTGTATTATCTAT；