[發明專利]一種用于轉基因大豆檢測的兩基因標準質粒分子及其構建

無效

• 申請號: 201010286872.0
• 申請日: 2010-09-20
• 公開（公告）號: CN102409080A
• 公開（公告）日: 2012-04-11
• 發明（設計）人: 王建華;王秀敏;滕達;楊雅麟
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院飼料研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于轉基因大豆檢測的兩基因標準質粒分子及其構建，其特征在于，含有大豆內源基因特異性序列Lectin?1和轉基因大豆品系GTS40-3-2外源基因EPSPS特異性序列。

2.根據權利要求1所述的轉基因大豆檢測用標準質粒分子，其特征是，所述的大豆內源基因Lectin指的是大豆凝集素基因，其在大豆基因組中高度保守，具有種間特異性、種內非特異性和單拷貝數的特點；所述的EPSPS基因是指5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因(EPSPS)。

3.根據權利要求1所述的轉基因大豆檢測用標準質粒分子，其中Lectin?1和EPSPS標準分子的引物序列如下：

4.一種如權利要求1所述的轉基因大豆檢測用標準質粒分子的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)利用GenBank數據庫進行生物信息學分析，查找并獲得大豆內源基因Lectin?1、轉基因大豆品系GTS-40-3-2外源基因EPSPS的特異性序列；

(2)根據Lectin?1基因序列、EPSPS基因序列利用Primer?Premier?5.0軟件設計PCR特異性定性引物，分別擴增這兩個基因；

(3)分別回收Lectin?1基因和EPSPS基因，將這兩個基因PCR回收產物構建到質粒載體pMDTM19-T?Simple上獲得中間質粒分子pMDLEC和pMDEPS；

(4)將中間質粒分子pMDLEC和載體pET30a分別用限制性內切酶Not?Ⅰ和Sal?Ⅰ進行雙酶切，回收目的基因片段及載體片段，用T4?DNA連接酶連接獲得質粒分子pETLEC；

(5)將中間質粒分子pMDEPS和pETLEC分別用限制性內切酶EcoR?Ⅰ和Xba?Ⅰ進行雙酶切，回收這兩種酶切產物，用T4DNA連接酶連接獲得質粒分子pETLE2；

(6)以質粒分子pETLE2為模板，用Lec-P1和Eps-P2引物擴增獲得Lec-Eps區擴增子序列；

(7)將Lec-Eps區擴增產物回收連接到載體pMDTM19-T?Simple上獲得質粒分子pTLE2。