[發明專利]小麥黃矮病毒的多重PCR檢測方法無效
| 申請號： | 201010267645.3 | 申請日： | 2010-08-31 |
| 公開（公告）號： | CN101921876A | 公開（公告）日： | 2010-12-22 |
| 發明（設計）人： | 吳云鋒;楊洋 | 申請（專利權）人： | 西北農林科技大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京億騰知識產權代理事務所 11309 | 代理人： | 陳惠蓮 |
| 地址： | 712100 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 小麥 病毒 多重 pcr 檢測 方法 | ||
1.一種利用多重PCR反應同時檢測小麥黃矮病種群中PAV、GPV、GAV三種病毒的方法，該方法包括小麥病毒總RNA的提取、逆轉錄反應制備cDNA模板，多重PCR反應，電泳檢測，確定病毒種類，其特征在于逆轉錄反應制備cDNA模板應用引物SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.6，多重PCR反應中應用引物SEQ?ID?NO.1-6，多重PCR反應的反應體系中，緩沖液濃度為0.4×-0.9×；dNTPs濃度為0.1-0.5mM；Mg2+濃度為1.0-3.5mM；退火溫度為51-55℃；循環次數為20-45次；延伸時間為30-55s。
2.根據權利要求1所述的方法，其中多重PCR反應的反應體系中，緩沖液濃度為0.8×或0.9×，dNTPs濃度為0.4mM或0.5mM，Mg2+濃度為2.5mM或3.5mM，退火溫度54℃，延伸時間45s，循環次數30次。
3.根據權利要求1所述的方法，多重PCR反應的反應體系中，Taq?DNA聚合酶濃度為0.04U/μL-0.06U/μL。
4.根據權利要求1所述的方法，多重PCR反應的反應體系中，緩沖液濃度為0.9×，dNTPs濃度為0.4mM，Mg2+濃度為3.5mM，Taq?DNA聚合酶濃度為0.06U/μL。
5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其中多重PCR反應的反應體系中，3對引物之間的摩爾比例為PAV∶GPV∶GAV＝2∶1∶1。
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