[發明專利]一種乙型腦炎疫苗制劑的生產方法

有效

• 申請號: 201010264210.3
• 申請日: 2010-08-27
• 公開（公告）號: CN102327607A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 劉鈿蓮;馬書智;艾文
• 申請（專利權）人: 麗珠集團疫苗工程股份有限公司
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 曹津燕

技術領域

本發明涉及一種乙型腦炎疫苗制劑的生產方法，具體涉及一種利用鋁佐劑原位吸附技術生產滅活病毒乙型腦炎疫苗制劑的方法。

背景技術

目前，國內滅活病毒乙型腦炎疫苗制劑的生產工藝多采用凍干制劑或鋁佐劑表面吸附，國外也有關于鋁佐劑表面吸附的報道。但是，這些方法制備出的乙型腦炎疫苗產品的免疫效果均還有待提高，同時還存在陽轉率提高的情況下，發熱率也同時提高的缺陷，嚴重地影響了滅活病毒乙型腦炎疫苗產品的推廣和使用。

發明內容

因此，本發明的目的在于提供一種利用鋁佐劑原位吸附技術生產乙型腦炎疫苗制劑的方法。與無佐劑制品和表面吸附制品相比，該方法生產的乙型腦炎疫苗制劑成功地解決了陽轉率和發熱率之間的矛盾；同時疫苗的免疫持久性明顯延長。

用于實現上述目的的技術方案如下：

一種乙型腦炎疫苗制劑的生產方法，該生產方法包括以下步驟：

向滅活和純化的乙型腦炎病毒培養液中加入1mol/L?pH8.5磷酸鹽緩沖溶液使其磷酸鹽濃度達到0.05mol/L，然后在攪拌下加入1mol/L的NaOH溶液和0.2mol/L的AlCl₃溶液進行反應并保持體系的pH為7.0，直至反應產物中的Al(OH)₃濃度為2.0～2.5mg/ml。

上述生產方法還可以包括以1mol/L的NaCl溶液和注射用水稀釋反應產物。優選地，反應產物被稀釋至Al(OH)₃濃度為0.5～0.75mg/ml，NaCl濃度為0.14～0.16mol/L。

上述生產方法還可以包括向稀釋后的反應產物加入添加劑。優選地，添加劑包括1％(g/ml)甘氨酸和5％(g/ml)蔗糖。

在上述生產方法中，所述滅活和純化的乙型腦炎病毒培養液的蛋白濃度可以為30～80μg/ml。

在上述生產方法中，所述乙型腦炎疫苗制劑的抗原量可以為5～10μg/劑，補結抗原量為1∶4～1∶8。其中，補結抗原即是用補體結合反應測得的抗原量，可溶性抗原，如蛋白質、多糖、類脂、病毒等或者顆粒性抗原，與相應抗體結合后，其抗原抗體復合物可以結合補體，但這一反應肉眼不能覺察，如再加入紅細胞和溶血素，即可根據是否出現溶血反應來判定反應系統中是否存在相對應的抗原和抗體，此反應即為補體結合反應。

本發明還提供了上述生產方法制備的乙型腦炎疫苗制劑。

與現有技術相比，本發明的生產方法采用鋁佐劑原位吸附技術因而具有以下顯著的優點：

1、鋁佐劑原位吸附制品的中和抗體效價明顯提高。

小鼠一針和二針免疫中和抗體效價的檢測結果表明，鋁佐劑原位吸附制品的中和抗體水平大大高于無佐劑制品，免疫效果持久。人體臨床試驗結果表明，與市場上的對照產品相比，鋁佐劑原位吸附制品能夠明顯增強免疫反應，陽轉率、中和抗體滴度和免疫持久性均大大提高。

2、有效地解決了陽轉率和發熱率之間的矛盾。

無佐劑乙腦疫苗和鋁佐劑表面吸附乙腦疫苗都存在抗原量和發熱率之間的矛盾，增加抗原量有利于提高陽轉率，但同樣發熱率也會有大幅度提高。現有產品通常以降低陽轉率和中和抗體滴度為代價來控制發熱率。鋁佐劑原位吸附解決了陽轉率和發熱率之間的矛盾。表面吸附是預先生成氫氧化鋁，再用氫氧化鋁吸附抗原。吸附均發生在佐劑表面。與此不同的是，原位吸附氫氧化鋁的生成過程與吸附過程同時進行，吸附過程中不斷生成的鋁佐劑將抗原緊緊包裹在內部。這種疫苗經免疫進入人體后，鋁佐劑還具有緩釋抗原作用，因而在保證陽轉率和中和抗體滴度大幅提高的情況下還能有效降低發熱反應的發生率。

3、原位吸附有利于提高產品的穩定性，延長貨架期。

國內外現有的鋁佐劑表面吸附制品都存在容易解吸附、穩定性差、貨架期短以及效力降低等缺點，而且解吸附的抗原容易成團使發熱率升高。現有制品的有效期一般為18～24個月，而鋁佐劑原位吸附的制品穩定性更好，貨架期延長，有效期可以穩定保持在36個月以上。

4、免疫持久性延長有利于加強對免疫人群的保護作用。

現在的免疫程序為基礎免疫注射兩針，1年后加強免疫1次。臨床研究結果表明，現有的乙腦疫苗產品基礎免疫六個月后人群中和抗體陽性率降至40％以下，本發明的方法生產的疫苗基礎免疫六個月后人群中和抗體的陽性率能維持在90％以上。證明本發明的方法生產的疫苗免疫持久性大大延長。按照流行病學普遍規律，人群中和抗體陽性率維持在60％以上，才能產生足夠的保護屏障，完全控制疾病流行。因此，本發明的方法生產的疫苗有利于加強對免疫人群的保護作用。

附圖說明