[發明專利]一種抗病毒藥物活性檢測方法及其應用

無效

• 申請號: 201010257186.0
• 申請日: 2010-08-19
• 公開（公告）號: CN101963589A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發明（設計）人: 肖小河;趙艷玲;王伽伯;張萍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三〇二醫院
• 主分類號: G01N25/20
• 分類號: G01N25/20;C12Q1/02
• 代理公司: 北京國浩君伍知識產權代理事務所(普通合伙) 11346
• 代理人: 朱登河

技術領域

本發明屬于藥物藥性檢測方法技術領域，具體涉及一種抗病毒藥物活性檢測方法的建立及應用。

背景技術

隨著醫藥領域的發展，為了安全用藥避免藥物中毒，人們對于藥物的有效部位以及這些有效部位在治療疾病中的應用越來越重視。目前針對治療某種疾病的藥物有效部位以及藥物用量的檢測方法通常采用的是先培養病毒微生物或者病毒細胞，使其在培養基等可見載體表面產生一定的宏觀表象，然后再將待測藥物通過物化手段加入病毒微生物或者病毒細胞的生活環境中，從而對病毒的繁殖或者生長起到一定的阻止作用，由于待測藥物的加入會影響加入藥物的載體表面產生的宏觀表象，產生不同的表象，研究人員通過這種差異來檢測藥物不同部位所具有的不同的藥效以及藥物用量對治療的影響。

目前檢測病毒的技術主要有：(1)、電子顯微鏡觀察，(2)、細胞病變法，(3)、染色法，(4)、酶免疫測定，(5)、病毒蛋白的印跡雜交實驗，(6)、PCR技術，但是上述技術各自有各自的缺陷，例如：

(1)、電子顯微鏡觀察：雖然電鏡可直觀病毒存在，是診斷病毒病的重要工具。但機器價格昂貴，技術要求高，不太適用于常規病毒學診斷試驗或大量標本的檢測；病毒量較大時才易得到陽性結果，應用范圍有限，且不能鑒別病毒的血清類型；

(2)、細胞病變法：通過檢測細胞病變效應(cytopathic?effect，CPE)、病毒蝕斑形成或病毒的產量被抑制程度，間接反映IFN的生物學活性。但是不是每種病毒在細胞培養中都能產生細胞病變，并且CPE判定主觀性強，準確性差，不適于準確計算病毒感染力及判斷藥物抗病毒活性。

因此急需一種新的檢測藥物活性的方法來達到簡單、易用、準確檢測的目的。

流行性腮腺炎簡稱流腮，是兒童和青少年中常見的呼吸道傳染病，由腮腺炎病毒所引起。臨床特征為發熱及腮腺非化膿性腫痛，并可侵犯各種腺組織或神經系統及肝、腎、心臟、關節等器官。流腮病毒是單股的核糖核酸病毒，屬于副粘液病毒類，含核糖核酸、蛋白質、碳水化合物和類脂，對腺體和神經組織易親和。由于流腮病毒對兒童和青少年的的危害性，因此研究各種藥物對流腮病毒的有效部位，對減少兒童和青少年服用的藥物具有積極的意義。

發明內容

生長熱力學理論認為，任何物理/化學反應發生時，均伴隨能量的轉移和熱變化，而這些能量轉移和熱變化均可用熱力學的理論和方法加以刻畫和分析。生物熱動力學就是研究生命體新陳代謝過程中能量轉移和熱變化，其基本內涵就是將生命體(機體、微生物、細胞)的能量代謝等過程以熱動力學函數的形式加以表征。

本發明的目的是為了解決上述病毒檢測方法中的不足，以生長熱力學理論為基礎，公開了一種以熱力學變化為原理的藥物活性檢測方法。

本發明藥物活性檢測方法的技術方案具體如下：

一種抗病毒藥物活性檢測方法，包括下述步驟：

(1)、選取與待檢藥物治療適應癥對應的微生物或細胞；

(2)、向步驟(1)中選取的微生物或細胞中加入待檢藥物，進行培養；

(3)、將加入了待檢藥物的微生物或細胞置于微量量熱儀中，得到微生物或細胞生長代謝的熱譜曲線，根據熱譜曲線的斜率和最大發熱功率參數評價藥物活性大小。

上述技術方案中所述的抗病毒藥物活性檢測方法，其中，步驟(2)中所述的待檢藥物為提取的待檢藥物活性成分。

上述技術方案中所述的抗病毒藥物活性檢測方法，其中，在所述的步驟(1)和步驟(2)之前還包括待檢藥物對微生物或細胞的毒性測定步驟。

上述技術方案中所述的抗病毒藥物活性檢測方法，其中，所述的待檢藥物對微生物或細胞的毒性測定步驟是指向相同細胞濃度的微生物或細胞中加入不同濃度的待檢藥物，然后與正常微生物或細胞對照觀察細胞病變情況，按Reed-Muench法計算半數有毒濃度和最大無毒濃度。

另外由于流腮病毒對兒童和青少年的危害，本發明的另一個目的在于公開了上述檢測方法在檢測板藍根治療流腮病毒有效部位的應用。

上述檢測方法在檢測板藍根治療流腮病毒有效部位的應用的技術方案具體如下：

上述技術方案中所述的檢測方法在測定板藍根清熱解毒活性中的應用，包括下述步驟：

(1)、選擇板藍根清熱解毒活性適應癥對應的流腮病毒；

(2)、取37℃，5％CO₂培養24h后的Hela細胞，加入100TCID₅₀的流腮病毒液對Hela細胞進行轉染；