[發明專利]一種溶藻弧菌菌株及其應用

有效

• 申請號: 201010254912.3
• 申請日: 2010-08-17
• 公開（公告）號: CN101993842A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 宋曉玲;劉莉;黃倢;楊冰
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/63
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 張中南

技術領域

本發明屬于益生菌領域，具體涉及一種溶藻弧菌菌株及其應用。

背景技術

抗生素的發現促進了人類醫學的巨大進步，抗生素也是動物養殖業尤其是水產養殖業抗菌治病的首選藥物。但隨著高密度、集約化、規模化、工廠化養殖模式的迅速發展，病害大量傳播、抗生素肆意濫用、養殖環境惡化、病原耐藥性增強、養殖動物藥物殘留等問題也日益為人們所關注。開拓和發展符合環境友好和可持續發展戰略的病害防治技術和產品已經成為水產養殖業的迫切需求。

拮抗是微生物之間普遍存在的自然現象。在同一生態位中微生物通過營養競爭、空間競爭或分泌抗生素、細菌素等毒素抑制其他微生物的生長。微生物控制技術便是應用這一原理，將具有拮抗特性的益生菌添加到飼料中或直接施入養殖水體，殺死或抑制病原微生物，可為養殖動物營造良好的生存環境。益生菌作為抗生素的替代品，對養殖產品無毒副作用、無殘留和抗藥性，提高了水產動物生產性能和健康水平，保證水產品質量及促進水產養殖業的可持續發展，能夠獲得較好的社會效益和經濟效益。

目前雖然許多商品益生菌制劑也用于水產養殖，但其菌株多來源于陸生環境或動物，并不適合在水產動物消化道和養殖水體中增殖，因此在篩選益生菌應著重考慮養殖水體和動物消化道中的土著菌。

發明內容

本發明的目的是提供一種溶藻弧菌菌株及其應用，即來源于對蝦消化道的一種內源性的溶藻弧菌菌株，該菌株可用于增強對蝦細胞和體液的免疫水平，特別是提高對蝦抗病毒感染能力。

本發明所涉及的菌株信息如下：溶藻弧菌SSL073(Vibrio?alginolyticus)菌株分離自健康中國對蝦消化道，經高劑量注射或投喂實驗確定對中國對蝦、凡納濱對蝦、日本對蝦等安全，無病原性。菌株于2010年7月30日在武漢典藏微生物所保藏，保藏編號為：CCTCC?M2010193。

溶藻弧菌SSL073菌株形態特征：

菌落特征：在普通營養平板上菌落大而光滑、不透明、濕潤、稍扁平。TCBS培養基上可生長，菌落呈黃色，在副溶血弧菌檢測培養基上菌落呈白色。

細胞特征：革蘭氏染色陰性，細胞形態短桿狀，極生單鞭毛，能運動，大小為(0.8-1.3)μm×(1.6-3.0)μm。無芽孢、莢膜。

溶藻弧菌SSL073菌株生理生化特征：

β-半乳糖苷酶反應ONPG陰性，精氨酸雙水解酶反應ADH陰性，賴氨酸脫羧酶反應LDC陽性，鳥氨酸脫羧反應ODC陰性，檸檬酸利用CIT陰性，H₂S產生H₂S陰性，脲酶反應URE陰性，色氨酸脫氨酶反應TDA陰性，吲哚產生IND陰性，3-羥基丁酮產生乙酰甲基甲醇反應VP陽性，明膠酶反應GEL陽性，葡萄糖反應GLU陽性，甘露醇反應MAN陽性，肌醇反應INO陰性，山梨醇反應SOR陰性，鼠李糖反應RHA陰性，蔗糖反應SAC陽性，蜜二糖反應MEL陰性，苦杏仁苷反應AMY陰性，阿拉伯糖反應ARA陰性，N₂O產生陽性，還原到N陽性。氧化酶實驗陽性，過氧化氫酶實驗陽性。

溶藻弧菌SSL073菌株的16rDNA堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示。

溶藻弧菌SSL073菌株可用于制備溶藻弧菌SSL073粉劑。

溶藻弧菌SSL073粉劑制備方法如下：從-80℃保存的菌種挑取少量劃線于2216E固體培養基，在28℃培養24h獲得單菌落，取一單菌落接種于溶藻弧菌種子培養液中，28℃搖瓶培養24h獲得種子液，再把種子液接種于溶藻弧菌發酵液中發酵培養，發酵溫度控制在25-28℃；發酵液OD₆₀₀值達到1.6時，終止發酵；獲得發酵菌液；取發酵菌液進行離心濃縮20-50倍制得菌濁液。按菌濁液體積比1∶5-1∶10加入裂解液重懸菌體，37℃消化24小時；300w、10s/10s超聲波破碎20分鐘，破碎后的菌液噴霧干燥(進風與出風溫度分別在195℃和85℃)，制得溶藻弧菌SSL073粉劑。

上述溶藻弧菌種子培養液成分質量百分比為：葡萄糖1.2％、蛋白胨1.0％、牛肉膏0.3％、酵母膏0.5％、檸檬酸三鈉0.8‰、K₂HPO₄0.2‰、KH₂PO₄0.1‰、MgSO₄0.4‰，pH為7.2。

上述溶藻弧菌發酵液成分質量百分比為葡萄糖1.2％、蛋白胨0.2％、牛肉膏1.5％、NaCl2.5％。