[發明專利]海洋擬諾卡氏菌株HY-G及其產生的β-葡萄糖苷酶

無效

• 申請號: 201010251259.5
• 申請日: 2010-08-12
• 公開（公告）號: CN101942406A
• 公開（公告）日: 2011-01-12
• 發明（設計）人: 吳少杰;馬桂珍;王淑軍;陳麗;焦豫良;王淑芳;暴增海
• 申請（專利權）人: 淮海工學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/42;C12R1/01
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 劉喜蓮

技術領域

本發明屬生物技術領域，具體地說是一種海洋擬諾卡氏菌菌株HY-G，本發明還涉及該菌株的產酶方法及其所產生的β-葡萄糖苷酶。?

背景技術

β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21)，是一類能夠水解結合于末端非還原性的β-葡萄糖苷鍵，同時釋放出β-D-葡萄糖和相應的配基的水解酶類。?

β-葡萄糖苷酶廣泛地存在于自然界許多動植物和微生物體內。β-葡萄糖苷酶的相對分子量范圍一般在40～250KDa之間。目前絕大多數生物所產生的β-葡萄糖苷酶最適pH都在酸性范圍，并且變化不大，一般在3.5-5.5之間，僅有少數β-葡萄糖苷酶最適pH在中性或堿性范圍內。β-葡萄糖苷酶的最適溫度在40～110℃之間都有分布。?

β-葡萄糖苷酶具有多方面的用途。在生物醫藥領域，由于天然藥物中含有種類眾多的苷類成分，其中有很大一部分都屬于β-葡萄糖苷類。研究發現，天然藥物活性成分去除β-葡萄糖基后，往往能提高藥效，因此，采用β-葡萄糖苷酶進行天然藥物活性成分的生物轉化受到重視，該方法具有反應條件溫和、特異性高、污染少等優點。在食品工業，β-葡萄糖苷酶作為一種風味酶，可用于果汁風味成分的改善、果酒和茶葉等飲料的增香等；此外，β-葡萄糖苷酶還在纖維素的水解、醫學診斷、植物病害防治等方面有著重要的價值。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種新的能產β-葡萄糖苷酶的海洋擬諾卡氏菌HY-G(Nocardiopsis?sp.HY-G)。?

本發明所要解決的另一個技術問題是提供了上述海洋擬諾卡氏菌HY-G(Nocardiopsis?sp.HY-G)產β-葡萄糖苷酶的方法及產品。?

本發明所涉及的菌株是海洋擬諾卡氏菌HY-G(Nocardiopsis?sp.HY-G)，該海洋擬諾卡氏菌HY-G已于2010年5月27日保藏在中國典型培養物保藏中心CCTCC，保藏編號為CCTCC?NO：M?2010126；保藏單位地址：中國.武漢.武漢大學，電話：[phone]。?

以下對本發明進行詳細的闡述。?

一、本發明所涉及的培養基。?

1、固體培養基(固體海水高氏一號培養基)，其組成如下：20g可溶性淀粉；1g?KNO₃；0.5g?K₂HPO₄；0.5g?MgSO₄·7H₂O；0.01g?FeSO₄·7H₂O；1000mL海水。其制法是：將上述成分用海水溶解后，再用NaOH調節初始pH至7.6-7.8，然后加入15g瓊脂，121℃滅菌15-20min，即得固體培養基。用于初次平板涂布分離時，還需在調節pH值之前加入0.03％的重鉻酸鉀以抑制樣品中真菌和細菌的生長。?

2、液體發酵培養基(液體海水高氏一號培養基)，其組成如下：20g可溶性淀粉；1g?KNO₃；0.5g?K₂HPO₄；0.5g?MgSO₄·7H₂O；0.01g?FeSO₄·7H₂O；1000mL海水。其制法是：將上述成分用海水溶解后得混合物，然后按大豆異黃酮苷∶混合物＝150～200mg/L的比例向混合物中加入大豆異黃酮苷作為產酶誘導物(以誘導其產β-葡萄糖苷酶)，再用NaOH調節初始pH至7.6-7.8，?121℃滅菌15-20min，即得液體發酵培養基。本發明所述的產酶誘導物大豆異黃酮苷為由染料木苷、大豆苷和黃豆黃苷組成的混合物，該混合物中，含大豆苷46.80％(重量百分比)、染料木苷12.98％、黃豆黃苷23.73％，其中的黃豆黃苷對本發明的菌株HY-G的產酶無誘導作用。也可以采用市售的其它比例的大豆異黃酮苷，優選其中含大豆苷40-50％，染料木苷10-15％，其余為黃豆黃苷。?

二、本發明海洋擬諾卡氏菌HY-G(Nocardiopsis?sp.HY-G)(以下簡稱菌株HY-G)的分離。?

1、樣品的采集與處理。?