[發(fā)明專利]多重PCR檢測食品中肉類來源的引物組及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010239180.0
• 申請日: 2010-07-29
• 公開（公告）號: CN101962675A
• 公開（公告）日: 2011-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 喬建軍;孫艷華;張智禹;關(guān)叢笑
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 陸藝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及多重PCR檢測食品中肉類來源的引物組及檢測試劑盒。?

背景技術(shù)

目前的肉制品市場中，一些單位和個人為了追求自身利益而以雞肉充豬肉，以豬肉充牛肉等，用低價劣質(zhì)的肉冒充高價優(yōu)質(zhì)的肉，這極大的損壞了消費者的利益和健康。由于國家沒有規(guī)定統(tǒng)一的肉類檢測方法，也沒有形成成熟、快速簡便的檢測肉類來源的行業(yè)方法，目前質(zhì)監(jiān)部門主要是通過肉制品的味道、色澤、肉類的紋理等進行肉類來源的判別工作，這些傳統(tǒng)鑒別方法對于市場上假冒生肉的鑒別起到了非常重要的作用。但是，對于很多熟肉制品(如香腸)來說，加入的肉經(jīng)過了粉碎處理，并且添加了香料掩蓋了原有的味道，傳統(tǒng)的方法難以進行準(zhǔn)確的肉類來源鑒定。?

目前，市場上經(jīng)過加工的熟肉制品質(zhì)量越來越難以鑒定，國家及地方各級質(zhì)監(jiān)部門急需要一種分析食品中的肉類來源的方法能夠快速，有效的對肉類開源進行檢測。分析食品中的肉類來源的方法主要有兩種：應(yīng)用抗體特異性的ELISA法和基于核酸特異性的PCR法。由于肉制品加工過程中蛋白質(zhì)容易變性，導(dǎo)致ELISA法鑒定肉類來源的穩(wěn)定性較差，容易出現(xiàn)偏差，且檢測步驟復(fù)雜，時間長，不利推廣。而PCR方法基于核酸的特異性，不受高溫的影響。食品的肉類中含有大量的核酸分子，通過合成種屬特異的引物并進行PCR，可以靈敏，快速的確定肉質(zhì)中的肉類來源，如果找到一種能同時檢測熟肉制品多種來源肉的種類，將可以大大縮短了檢測的時間，提高了檢測的效率，更利于應(yīng)用于實際。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種多重PCR檢測食品中肉類來源的引物組。?

本發(fā)明的第二個目的是提供一種多重PCR檢測食品中肉類來源的試劑盒。?

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：?

一種多重PCR檢測食品中肉類來源的引物組，由檢測豬肉引物對、檢測雞肉引物對、檢測牛肉引物對和檢測羊肉引物對組成，所述檢測豬肉引物對的上下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列，所述檢測雞肉引物對的上下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列，所述檢測牛肉引物對的上下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列，所述檢測羊肉引物對的上下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列。?

一種多重PCR檢測食品中肉類來源的試劑盒，該試劑盒包括引物組、PCR管和2×Taq?PCR反應(yīng)混合試劑，所述引物組由檢測豬肉引物對、檢測雞肉引物對、檢測牛肉引物對和檢測羊?肉引物對組成，所述檢測豬肉引物對的上下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.1、SEQ?IDNO.2所示的核苷酸序列，所述檢測雞肉引物對的上下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列，所述檢測牛肉引物對的上下游引物分別是序列表中SEQ?IDNO.5、SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列，所述檢測羊肉引物對的上下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列。?

本發(fā)明的引物組可以應(yīng)用于多重PCR技術(shù)檢測食品中肉類來源。本發(fā)明的試劑盒可以靈敏，快速地確定熟肉制品中的肉類來源，多重PCR方法更是縮短了檢測的時間，提高了檢測的效率，將多重PCR方法應(yīng)用于食品檢測領(lǐng)域。?

附圖說明

圖1應(yīng)用多重PCR進行肉類來源分析的瓊脂糖電泳圖。?

圖中第1泳道是marker，第2條泳道是四重PCR結(jié)果，第3，4，5，6泳道分別是豬，牛，羊，雞的單重PCR結(jié)果。?

圖2應(yīng)用多重PCR進行市場中香腸肉類來源分析的瓊脂糖電泳圖。?

圖中第1泳道是DNAmarker(100bp，250bp，500bp，750bp，1000bp，2000bp)，第2，3，4，5泳道分別是豬，牛，羊，雞的單重PCR結(jié)果，第6泳道是牛肉腸A的多重PCR檢測結(jié)果，第7泳道是牛肉腸B的多重PCR檢測結(jié)果。?

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。?

實施例1?

本發(fā)明是對于食品中肉類來源的檢測，通過PCR反應(yīng)擴增出來的產(chǎn)物長度分別為豬：136bp，牛：705bp，羊：199bp，雞：327bp。?

一.肉制品中DNA的提取?

樣品處理：將等質(zhì)量的豬、牛、羊和雞肉組織樣品研充分磨備用。?