[發明專利]抑制腸道病毒71型基因表達的siRNA及組合物和應用

有效

• 申請號: 201010235942.X
• 申請日: 2010-07-21
• 公開（公告）號: CN102337263A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: 梁子才;張鴻雁
• 申請（專利權）人: 蘇州瑞博生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P31/14;A61P25/00;A61P11/00;A61P9/00
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 王崇;王鳳桐

技術領域

本發明是關于一種用于抑制腸道病毒71型基因表達的siRNA以及含有該siRNA的藥物組合物，還涉及該siRNA在制備用于抑制腸道病毒71型基因表達的藥物中的應用和在制備用于治療和/或預防疾病的藥物中的應用。

背景技術

腸道病毒71型(entorovirus?71，EV71)是小RNA病毒科(Picornaviridae)腸道病毒屬(Enterovirus)成員，是手足口病(hand-foot-and-mouth?disease，HFMD)的主要致病原之一。EV71的感染除引起患者手足口病之外，還可導致皰疹性咽峽炎、無菌性腦膜炎、腦干腦炎和脊髓灰質炎樣的麻痹性疾病等多種與神經系統相關的疾病，致殘及病死率較高。

由EV71病毒引起的手足口病是一種嬰幼兒常見的傳染病，以三歲以下嬰幼兒發病為主，成人感染病毒后發病并不多見，但能傳播病毒。病毒可經胃腸道(糞-口途徑)傳播，也可經呼吸道(飛沫、咳嗽、打噴嚏等)傳播，亦可因接觸患者口鼻分泌物、皮膚或粘膜皰疹液及被污染的手及物品等造成傳播。其臨床上以發熱和手、足、口腔等部位出現皮疹、潰瘍等表現為主要癥狀，個別患者可引起無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、神經源性肺水腫和心肌炎等致命性并發癥。2008年5月2日起我國衛生部已將該病納入丙類法定傳染病。

近年來，EV71病毒在亞太地區到了幾次大范圍的暴發流行并呈上升趨勢，1975年保加利亞大流行，共有705名患兒感染，死亡44例；1997年馬來西亞大流行感染2628人，死亡30例；1998年臺灣地區發生暴發流行，約有超過12萬人被感染，死亡78例。尤其是自2008年3～4月，在我國安徽省阜陽爆發了急性傳染性手足口病的疫情之后，我國多個省市均先后發現手足口病的大范圍流行。特別是在今年更是出現爆發性流行，據統計，今年截至4月30日，全國累計報告手足口病38.6萬多例；死亡236人；僅今年四月一個月全國報告病例為24.9萬，死亡病例為175例，與去年同期相比，全國報告病例增加10萬多例，增長37.49％；死亡病例增加139例，增長143％。

因此，EV71病毒引起的手足口病已成為嚴重威脅嬰幼兒健康的流行最為廣泛的嚴重性疾病。

目前無特異性治療方法，只是以支持療法為主，主要應用的藥物有干擾素和其他光譜抗病毒藥物(阿昔洛韋、更昔洛韋、利巴韋林等)，但是這些藥物的缺點在于針對性差，特異性低，毒副作用高或尚不明確。今年3月份，國家衛生部在全國衛生系統手足口病防治工作電視電話會議中表示要進一步加快手足口病診斷試劑、疫苗、治療藥物研發等實用性研究，為手足口病防治提供強大的科技支撐。

因此，開發出一種預防和/或治療手足口病的新途徑成為迫切需要解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種預防和/或治療手足口病的新途徑。

RNA干擾技術的出現為治療腸道病毒71型(EV71)感染開辟了一個新的方向。RNA干擾(RNA?interference，RNAi)是由雙鏈RNA(double-stranded?RNA，dsRNA)分子在mRNA水平關閉相應基因的表達或使該基因沉默的過程。RNA干擾技術又被形象地稱為基因敲低(knock-down)或基因沉默(gene?silencing)，是一種典型的轉錄后基因調控方法，又稱轉錄后基因沉默(post-transcriptional?gene?silencing，PTGS)。最早有關RNA干擾的報道出現在1990年，由兩個不同的研究小組同時報道了轉基因植物中的RNA干擾現象，以后又在線蟲、果蠅、斑馬魚和小鼠等幾乎所有真核生物中觀察到了RNA干擾現象。1999年，Hamilton和Baulcombe在發生RNA干擾的植物中檢測到了長度為21-25個核苷酸的RNA片段，這些RNA片斷被證明是RNA干擾所必需的，稱為小分子干擾RNA(siRNA)。雙鏈siRNA與細胞源性的相關酶和蛋白質形成RNA誘導的沉默復合體(RNA-induced?silencing?complex，RISC)。在RNA干擾過程中，雙鏈siRNA中的正義鏈被排除出復合體，反義鏈指導RISC結合到靶mRNA的相應位點，然后由復合物中的核糖核酸酶III降解靶mRNA，從而關閉靶基因的表達。

EV71病毒的基因組為含有大約7411個核苷酸的單股正鏈RNA。本發明提供的針對EV71病毒基因組中不同基因的siRNA，能有效的抑制由EV71病毒基因的表達和復制，從而在基因水平對侵入機體的EV71病毒起作用，起到預防和/或治療手足口病的作用。