[發明專利]源自厚殼貽貝的抗氧化肽的制備方法和用途

有效

• 申請號: 201010234963.X
• 申請日: 2010-07-22
• 公開（公告）號: CN101906456A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發明（設計）人: 戴志遠;張婷;王宏海;張燕平;張艷萍
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;A61K38/16;A61K8/64;A23L1/305;A23K1/16;A61P39/06;A61Q19/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發明涉及生物活性肽的制備工藝，更具體的說，涉及一種厚殼貽貝抗氧化肽的制備方法及應用。

背景技術

厚殼貽貝(Mytilus?coruscus)，屬軟體動物門(Mollusca)、瓣鰓綱(Lamellibranchia)、異柱目(Anisomyaria)、貽貝科(Mytilidae)，富產于浙江省嵊泗列島周圍海域，是一種高蛋白、低脂肪、富含多種營養成分的雙殼類海洋軟體動物。

作為傳統的滋補食療品，貽貝素有“海中雞蛋”的美譽。現代科學研究表明，貽貝具有極高的營養價值，干貽貝含50％～70％的蛋白質，6％～15％的脂肪，8％～14％糖類，并富含多種維生素及鈣、磷、鐵、碘等營養成分。貽貝還有很高的藥用價值和食療功效，據《本草綱目》記載，貽貝肉能治“虛勞傷憊，精血衰少，吐血久痢，腸鳴腰痛”。《大明日華子本草》：“煮熟食之，能補五臟，益陽事，理腰腳氣，消宿食，除腹中冷氣”。現代臨床試驗表明，長期食用貽貝，對肝腎不足、眩暈盜汗、腎陽虛弱、腰痛、小腹冷痛以及高血壓、動脈血管硬化等均有一定療效。

但由于貽貝常溫下不耐貯藏及其生產的季節性，使貽貝的開發利用受到很大限制，目前市場上只有附加值較低的干貨、罐頭等制品，隨著養殖技術日趨完善，貽貝年產量日益增高，貽貝加工與高值化利用逐漸引起人們的注意。以天然食品作為蛋白源生產的抗氧化肽因其高效、低毒、易吸收等優點越來越受到歡迎，貽貝因其高蛋白、來源豐富等特點成為制備抗氧化肽的優良原料。

目前已有研究者成功利用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶從牡蠣蛋白中獲得了抗氧化肽(專利公開號CN1768765A)，但該技術中未提及產率，使得產業化生產不經濟；且酶解過程中使用的酶量較大，加大了生產成本，沒有找到一個合適的經濟位點；同時由于該方法的原料來源不夠廣泛、不耐貯運、成本較高等缺點，不利于工業化大規模生產。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種源自厚殼貽貝的抗氧化肽制備方法，該方法條件溫和、操作簡單、原料來源豐富、價格低廉；所制備的抗氧化肽活性較強。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種源自厚殼貽貝蛋白的抗氧化肽的制備方法，依次包括以下步驟：

1)、以厚殼貽貝肉脫脂干粉作為原料；在原料中加入水，原料與水的質量比為2～5∶100；

2)、將步驟1)的所得物先均質8～12min，然后預熱至37～60℃，保持恒溫，調節pH至7.0～9.0，最后加入蛋白酶啟動酶解反應；蛋白酶與原料中所含蛋白的重量比為1.5～2.5％，酶解反應時間為2～4h；

3)、酶解反應結束后調整pH至6.9～7.1；滅酶、離心后通過超濾富集活性肽，最后經濃縮和冷凍干燥，得抗氧化肽。

作為本發明的源自厚殼貽貝蛋白的抗氧化肽的制備方法的改進：步驟1)中的厚殼貽貝肉脫脂干粉的制備方法為：將厚殼貽貝肉干粉在40℃下，按1kg∶4L的料液比加入質量濃度95％的乙醇脫脂4h；重復脫脂三次(即重復實施上述脫脂步驟共3次)，接著于40℃真空干燥、粉碎至能過100目篩。

作為本發明的源自厚殼貽貝蛋白的抗氧化肽的制備方法的進一步改進：步驟2)中的蛋白酶為Alcalase2.4L堿性蛋白酶、復合蛋白酶、中性蛋白酶或胰蛋白酶。

在本發明中，所用的蛋白酶均為市購產品；例如：

Alcalase2.4L堿性蛋白酶(酶活力為9.4×10⁴U/g)可購自諾維信酶制劑公司；

復合蛋白酶(酶活力為4.9×10⁴U/g)可購自諾維信酶制劑公司；

中性蛋白酶(酶活力為2.7×10⁴U/g)可購自諾維信酶制劑公司；

胰蛋白酶((酶活力為5.6×10⁴U/g)可購自諾維信酶制劑公司。

作為本發明的源自厚殼貽貝蛋白的抗氧化肽的制備方法的進一步改進：步驟2)為：先水浴加熱至37～60℃，保持恒溫，再調節pH至7.0～9.0，最后加入蛋白酶啟動酶解反應，酶解過程連續攪拌，并保持恒溫和pH恒定。

作為本發明的源自厚殼貽貝蛋白的抗氧化肽的制備方法的進一步改進：步驟3)為：酶解反應結束后調整酶解反應液的pH至7.0，然后于95℃水浴滅酶10～15min，冷卻至室溫后，離心，取上清液進行超濾。