[發明專利]一種同步檢測多種煙草病毒的引物組和試劑盒

無效

• 申請號: 201010232748.6
• 申請日: 2010-07-21
• 公開（公告）號: CN101875981A
• 公開（公告）日: 2010-11-03
• 發明（設計）人: 成巨龍;吳云鋒
• 申請（專利權）人: 陜西省煙草研究所;西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京億騰知識產權代理事務所 11309
• 代理人: 陳惠蓮

1.一種同步檢測多種煙草病毒的試劑盒，該試劑盒由組分I和組分II組成；組分I和組分II中的各試劑單獨分裝，組分I包含反轉錄酶、RNA酶抑制劑，dNTP混合物，反向引物序列組，反轉錄反應緩沖液；組分II包含PCR反應緩沖液，dNTP混合物，MgCl₂，Taq?DNA聚合酶，PCR引物組，其特征在于反向引物序列組包含SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：8和SEQ?ID?NO：10；PCR引物組包含5對引物SEQ?ID?NO：1-10，序列信息如下：

第1對引物：

正向序列：SEQ?ID?NO.1：5′-TAGACCCGCTAGTCACAG-3′

反向序列：SEQ?ID?NO.2：5′-CAGAGGTCCAAACCAAAC-3′

第2對引物：

正向序列：SEQ?ID?NO.3：5′-GTGGGTGACAGTTCGTAAA-3′

反向序列：SEQ?ID?NO.4：5′-GTGGGAATGCGTTGGT-3′

第3對引物：

正向序列：SEQ?ID?NO.5：5′-TGATGGATGGTGAGGAG-3′

反向序列：SEQ?ID?NO.6：5′-GTGCCGTTCAGTGTCTT-3′

第4對引物：

正向序列：SEQ?ID?NO.7：5′-CCGAGAATCAAGGCTATC-3′

反向序列：SEQ?ID?NO.8：5′-CGCTAAACCTACATCCC-3′

第5對引物：

正向序列：SEQ?ID?NO.9：5′-GAGGTCGTGAACTTACAGC-3′

反向序列：SEQ?ID?NO.10：5′-GAGGTCGTGAACTTACAGC-3′。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其中煙草病毒選自煙草花葉病毒(TMV)、黃瓜花葉病毒(CMV)、馬鈴薯Y病毒(PVY)、煙草蝕紋病毒(TEV)和煙草脈帶花葉病毒(TVBMV)。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其中PCR引物組中5對引物濃度比例為第1對引物∶第2對引物∶第3對引物∶第4對引物∶第5對引物＝1.2-1.6∶0.8-1.2∶0.8-1.2∶0.8-1.2∶1.3-1.7。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其中PCR引物組中5對引物濃度比例為第1對引物∶第2對引物∶第3對引物∶第4對引物∶第5對引物＝1.4∶1∶1∶1∶1.5。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其中組分II中dNTP濃度為0.12-0.32mmol/L；Taq?DNA聚合酶濃度為0.02-0.12U/μL；MgCl₂濃度為1.2-3.2mmol/L。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中dNTPs濃度為0.28mmol/L，Taq?DNA聚合酶濃度為0.10U/μL，MgCl₂濃度為2.4mmol/L。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其中組分I中，反轉錄酶為M-MLV反轉錄酶。

8.根據權利要求1所述的試劑盒，其中組分I的組成如下：

各2.5mmol/L的dNTP??????????5μL

10μmol/L的反向引物序列組??1μL

5×RT?buffer???????????????5μL

40U/μL的RNase抑制劑???????0.5μL

200U/μL的M-MLV反轉錄酶????1μL

DEPC-H₂O???????????????????7μL。