[發(fā)明專利]土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌液體菌劑的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010231423.6
• 申請(qǐng)日: 2010-07-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102021118A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫榮高;鐘芳;李春杰;趙瑾;柴青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭州市南北兩山環(huán)境綠化工程指揮部;甘肅求實(shí)生物工程有限公司;蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N1/00
• 分類號(hào): C12N1/00;C12N1/20;C02F3/34;C05F11/08;A23K1/16;C12R1/11;C12R1/07;C12R1/065
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責(zé)任公司 62102
• 代理人: 張真

1.一種土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌液體菌劑，其特征在于由巨大芽孢桿菌(Bacillus?megaterium)、膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus?mucilaginosus)、圓褐固氮菌(Azotobacter?chroococcum)和液體培養(yǎng)基組成，其三種菌株的重量百分比為巨大芽孢桿菌為55～65％、膠凍樣芽孢桿菌為30～35％、圓褐固氮菌5～10％，所述的巨大芽孢桿菌的保藏號(hào)為CGMCC?No.3770；所述的膠凍樣芽孢桿菌的保藏號(hào)為CGMCC?No.3769；所述的圓褐固氮菌的保藏號(hào)為CGMCCNo.3768。

2.如權(quán)利要求1所述的土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌液體菌劑，其特征在于所述的液體培養(yǎng)基包括有在1升新鮮豆腐廢水或粉絲廢水或玉米淀粉廢水或洋芋淀粉廢水中加入硫酸銨1-2g，磷酸0.5-1ml，用1％的石灰水調(diào)pH值7.2-7.5。

3.一種土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌液體菌劑的制備方法，其特征在于有如下步驟：

A.土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌瓊脂斜面培養(yǎng)基的制備及菌種的培養(yǎng)：

a.瓊脂斜面培養(yǎng)基的制備：麥芽汁0.5-2％、葡萄糖0.5-2％、蛋白胨0.2-0.6％、瓊脂粉1-3％、無(wú)菌水80-120ml，加熱溶解后，用1％的氫氧化鈉調(diào)pH值至7.0-7.5，經(jīng)110-114℃，30-35分鐘蒸汽滅菌，然后在無(wú)菌條件下分裝于15×1.5cm的干燥滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用；

b.土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌菌種的培養(yǎng)：分別取巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌的母種瓊脂斜面菌，在無(wú)菌條件下，轉(zhuǎn)種于上述制備的瓊脂斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)28-32℃、24-48小時(shí)培養(yǎng)，即得瓊脂斜面菌種，為巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌一級(jí)菌種；

B.所述土著益生圓褐固氮菌瓊脂斜面培養(yǎng)基的制備及菌種的培養(yǎng)：

a.瓊脂斜面培養(yǎng)基的制備：磷酸二氫鉀0.01-0.03％，硫酸鎂0.01-0.03％，氯化納0.01-0.03％，碳酸鈣0.4-0.6％，甘露醇0.8-1.2％，硫酸鈣0.08-0.12％，瓊脂1.8-2.2％，水80-120毫升，加熱溶解用1％的氫氧化納調(diào)pH值6.8-7.0，經(jīng)110-114℃，30-35分鐘蒸汽滅菌，然后在無(wú)菌條件下，分裝于15×1.5cm干燥滅菌的試管擺成斜面待凝固后備用；

b.土著益生圓褐固氮菌菌種的培養(yǎng)：取土著益生圓褐固氮菌的母種瓊脂斜面菌，在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)種于上述制備的瓊脂斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)28-32℃，48-32h，即得瓊脂斜面菌種，為圓褐固氮菌一級(jí)菌種；

C土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌、圓褐固氮菌液體培養(yǎng)基的制備及液體菌種的培養(yǎng)：

a.液體培養(yǎng)基的制備：在1升新鮮豆腐廢水或粉絲廢水或玉米淀粉廢水或洋芋淀粉廢水中加入硫酸銨1-2g，磷酸0.5-1ml，用1％的石灰水調(diào)pH?7.0-7.5，分裝于500ml三角燒瓶中，分裝量為瓶子容量的1/4，然后經(jīng)110-112℃，30-35分鐘高壓滅菌，冷卻后備用；

b.分別取巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌的一級(jí)菌種，在無(wú)菌條件下，接種于液體培養(yǎng)液中，經(jīng)28-32℃、24-48小時(shí)培養(yǎng)，其培養(yǎng)液為二級(jí)菌種；

c.分別取巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌的二級(jí)菌種再擴(kuò)大培養(yǎng)，上搖床振蕩培養(yǎng)，經(jīng)振幅100～120r/min、溫度28～32℃、18～24小時(shí)培養(yǎng)，其菌液為三級(jí)菌種；

d.分別將重量百分比為巨大芽孢桿菌為55～65％、膠凍樣芽孢桿菌為30～35％、圓褐固氮菌為5～10％三級(jí)菌種再擴(kuò)大培養(yǎng)，三種菌在同一個(gè)發(fā)酵罐，經(jīng)28-32℃、18-24小時(shí)的通氣攪拌發(fā)酵培養(yǎng)，其菌液為巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌混合菌劑，即為四級(jí)菌種，然后繼續(xù)逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)。

4.一種土著益生巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和圓褐固氮菌液體菌劑在農(nóng)作物和植物生長(zhǎng)劑的應(yīng)用。