[發明專利]一種測定糖化血紅蛋白百分比的方法

有效

• 申請號: 201010213811.1
• 申請日: 2010-06-30
• 公開（公告）號: CN101915849A
• 公開（公告）日: 2010-12-15
• 發明（設計）人: 陳明峰;余嘉陵;楊青;鄭筱雯
• 申請（專利權）人: 深圳市國賽生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/72
• 分類號: G01N33/72;G01N21/82
• 代理公司: 深圳新創友知識產權代理有限公司 44223
• 代理人: 江耀純

技術領域

本發明涉及醫學免疫，具體而言是涉及一種可以直接測定糖化血紅蛋白百分比的方法及其試劑。

背景技術

糖化血紅蛋白(glycosylated?hemoglobin，HbA1c)是人體血液中紅細胞內的血紅蛋白與血糖結合的產物。糖化血紅蛋白可以穩定可靠地反映出檢測前120天內的平均血糖水平，且受抽血時間，是否空腹，是否使用胰島素等因素干擾不大。因此，國際糖尿病聯盟推出了新版的亞太糖尿病防治指南，明確規定糖化血紅蛋白是國際公認的糖尿病監控“金標準”。如果空腹血糖或餐后血糖控制不好，糖化血紅蛋白就不可能達標。

常用的測定糖化血紅蛋白百分比的方法有離子交換層析、高效液相色譜、免疫法、酶法等。其中離子交換層析、高效液相色譜法需要特定的儀器，價格昂貴，不適用于中小型醫院的使用。酶法檢測糖化血紅蛋白是利用氧化還原反應，需要多種酶的參與。而臨床上常使用的免疫學方法有兩種，一種是需要單獨測定血液樣本中的總血紅蛋白和糖化血紅蛋白的濃度，并且隨后計算糖化血紅蛋白與總血紅蛋白的比值的免疫競爭抑制法，另一種是可以直接測定糖化血紅蛋白百分比的膠乳凝集法，此法需要在使用前配制抗體工作液，且配制好的抗體工作液穩定期較短。

臨床上常使用的可以直接測定糖化血紅蛋白百分比的膠乳凝集法，均需要在使用前配制抗體工作液，且配制好的抗體工作液穩定期較短，一般在10-15天左右即失效，雖然放置在-10℃以下冷凍可保存數月，但不能反復凍融，不利于日常使用，而且低溫冰箱較難獲得。

發明內容

介紹本發明的技術方案前，首先對其原理進行分析說明，以便能夠被更好的理解。本發明檢測技術采用定時散色比濁法為檢測原理，可溶性抗原與特異性的抗體反應形成不溶性復合物，當光線通過反應懸液時發生散射并由特定蛋白分析儀檢測到，散射光值的多少與測試樣品中的特定蛋白濃度成一定比例。在本發明中，利用抗原抗體反應直接測定總血紅蛋白中糖化血紅蛋白的百分含量，樣品中總血紅蛋白和HbA1c與乳膠有相同的非特異性吸附而固相化，當加入HbA1c的特異性單克隆抗體后形成乳膠-HbA1c-鼠抗人HbA1c單克隆抗體的復合物，此復合物由于羊抗鼠IgG抗體而形成凝集，凝集量與乳膠表面固相化的HbA1c量成一定比例關系。

為克服以上現有技術的不足，本發明提供一種無需在使用前配制抗體工作液即可直接測定糖化血紅蛋白百分比的方法，其包括如下步驟：

a.將全血樣本與溶血液混合均勻；

b.取適量溶血后的樣本加入懸浮在甘氨酸緩沖液中的乳膠；

c.經預定時間后再分別加入抗體A試劑及抗體B試劑；

d.混合均勻后在單波長光照射條件下，通過特定蛋白分析儀讀取散射值；

e.最后根據所述散射值從標準曲線圖中讀取所述糖化血紅蛋白的百分比；

所述抗體A試劑是羊抗鼠IgG抗體和甘氨酸緩沖液的混合液，抗體B是鼠抗人HbA1c單克隆抗體和甘氨酸緩沖液的混合液。

優選的，所述步驟c中的預定時間為6.5分鐘，所述步驟d中的單波長光的波長為630nm。

再優選的，所述步驟a中的溶血液是H₂O，所述步驟b中的乳膠濃度為0.1％、甘氨酸緩沖液的濃度為15mmol/L，所述步驟c中的羊抗鼠IgG抗體濃度為0.005mg/ml～0.007mg/ml、鼠抗人HbA1c單克隆抗體濃度為0.05mg/ml、甘氨酸緩沖液的濃度為60mmol/L。

進一步優選的，所述羊抗鼠IgG的濃度為0.006mg/ml。

本發明的有益效果是：

本發明的測定方法以定時散射比濁法為檢測原理，不需要單獨測定血液樣本中的總血紅蛋白及糖化血紅蛋白含量即可直接確定其中的糖化血紅蛋白百分比，且無需在使用前配制抗體工作液即可直接測定，即延長了試劑的有效使用時間，又簡化了操作步驟。

將步驟c中的預定時間設為6.5分鐘，步驟d中的單波長光的波長為630nm～690nm，時間是，同類產品都需要10分鐘以上的測試時間。采用波長范圍在630nm～690nm的單波長光(可見光里面最長的波長)，可獲得最穩定的測試結果；同時，在以上預定的波長范圍內，6.5分鐘是最佳的測試時間，也即此時間是基于確保測試結果準確及穩定的最快時間。

羊抗鼠IgG的濃度范圍為0.005mg/ml～0.007mg/ml，是因為此抗體的需要量很少，采用此低濃度的目的是為了方便加樣。因為兩種抗體是分別加入的，如果濃度過高，無法加樣(極小體積的加樣很難操作且易導致加樣重復性差)，如濃度過低，則抗體穩定性不好。所以采用此濃度范圍，既方便加樣，抗體穩定性又好。