[發明專利]甘氨酸的測定方法與甘氨酸測定試劑盒-9086

無效

• 申請號: 201010209346.4
• 申請日: 2010-06-23
• 公開（公告）號: CN102297994A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/31;C12Q1/32;C12Q1/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

【技術領域】

本發明涉及食品檢驗測定技術領域，更具體地，本發明涉及甘氨酸測定方法及其試劑盒。

【背景技術】

甘氨酸為非人體必需氨基酸。甘氨酸有獨特的甜味，能緩和酸、堿味，掩蓋食品中添加糖精的苦味并增強甜味。人體若攝入甘氨酸的量過多，不僅不能被人體吸收利用，而且會打破人體對氨基酸的吸收平衡而影響其它氨基酸的吸收，導致營養失衡而影響健康。甘氨酸不能被人體利用，只能分解轉化為熱能，這樣會增加肝臟負擔。而分解產物中的含氮化合物要通過尿液排出體外，又會增加腎臟負擔。如果大量、長期食用這類食品，可能造成肝腎損傷。部分含乳飲料企業為提高產品中蛋白質含量，在生產加工中違規使用甘氨酸，對青少年及兒童的正常生長發育很容易帶來不利影響。

按照我國《食品添加劑使用衛生標準》GB2760規定，甘氨酸在作為食品添加劑只允許在調味劑與豆奶中使用，且最高限量為每公斤1克，但在含乳飲料中不允許使用。

【發明內容】

[要解決的技術問題]

本發明的目的是提供一種甘氨酸的測定方法。

本發明的另一個目的是提供一種甘氨酸測定試劑盒。

[技術方案]

本發明是通過下述技術方案實現的。

本發明的方法是一種采用二倍擴增法、酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)聯法(Couple?Reaction)的聯用技術，利用測定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處的吸光度變化測定甘氨酸的方法。

本發明甘氨酸測定方法的的技術原理是根據下述氰化氫合成酶、酮戊二酸合成酶、乙醛脫氫酶的系列催化反應完成：

甘氨酸+2輔酶??氰化氫合成酶??氰化氫+二氧化碳+2還原型輔酶

二氧化碳+琥珀酰輔酶A+還原型鐵氧還蛋白??酮戊二酸合成酶

????????????????????????酮戊二酸+輔酶A+氧化型鐵氧還蛋白

輔酶A+乙醛+輔酶??已醛脫氫酶?乙酰輔酶A+還原型輔酶

本發明的方法利用氰化氫合成酶(hydrogen?cyanide?synthase；EC?1.4.99.5)酶(偶)聯酮戊二酸合成酶(Oxoglutarate?synthase；EC?1.2.7.3)、乙醛脫氫酶(acetaldehyde?dehydrogenase；EC?1.2.1.10)酶促反應終點法。氰化氫合成酶酶解甘氨酸反應產生二氧化碳，再通過(偶)聯合酮戊二酸合成酶、乙醛脫氫酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度，這樣可以通過測量340nm處吸光度上升的程度，可以測算甘氨酸的濃度大小。

本發明是通過下述技術方案實現的。

本發明涉及一種甘氨酸的測定方法。該甘氨酸測定方法的步驟如下：

A、樣品準備：

A.1標準樣品的制備

將一定量的甘氨酸溶于水或緩沖液中，再將甘氨酸濃度調整到1毫摩爾/升，得到的溶液作為標準樣品；

A.2待測樣品的制備

待測液體樣品直接測試，無須預處理；將一定量的待測固體樣品像制備標準樣品一樣溶于水或緩沖液中；

A.3空白樣品

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其甘氨酸濃度為0毫摩爾/升；

B、試劑溶液的制備：

分別移取或稱取緩沖液、穩定劑、輔酶、氰化氫合成酶、酮戊二酸合成酶、乙醛脫氫酶、琥珀酰輔酶A、還原型鐵氧還蛋白與乙醛，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-5mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L與1-100mmol/L；

C、待測樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進行混合，在溫度15-45℃下反應5-60分鐘，在主波長340nm與副波長405nm(如果受儀器限制可以不設副波長)下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化；

D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標準樣品的吸光度隨時間的變化；

E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)空白樣品的吸光度隨時間的變化；

F、數據處理