[發(fā)明專利]豬干擾素基因家族及其作為抗豬藍(lán)耳病藥物及疫苗佐劑的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010208935.0
• 申請日: 2010-06-24
• 公開（公告）號: CN101955941A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭兆鑫;趙欣;程功;劉明秋;嚴(yán)維耀
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號: C12N15/20
• 分類號: C12N15/20;C12N15/63;C07K14/555;A61K48/00;A61K39/39;A61P31/14;A61P31/16;A61P31/20
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.從家豬基因組中分離到的干擾素基因家族，其特征在于所述家豬干擾素基因編碼的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1，SEQ?ID?NO.3，SEQ?ID?NO.5，SEQ?ID?NO.7，或SEQ?IDNO.9；其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2，SEQ?ID?NO.4，SEQ?ID?NO.6，SEQ?ID?NO.8，SEQ?IDNO.10。

2.一種如權(quán)利要求1所述的從家豬基因組中分離到的干擾素基因家族作為抗豬病毒藥物和佐劑抗病毒藥物和佐劑的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述豬病毒為豬藍(lán)耳病病毒，豬口蹄疫病毒，豬流感病毒，或豬圓環(huán)病毒。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于將所述干擾素基因家族中的一種或任意幾種，利用分子生物學(xué)技術(shù)克隆入真核表達(dá)載體，獲得重組質(zhì)粒；所述真核表達(dá)載體是具有真核啟動子，原核復(fù)制子或原核抗性基因為特征的任一種DNA表達(dá)載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于由所述的重組質(zhì)粒單獨(dú)使用，或由任一具輔助質(zhì)粒進(jìn)入真核細(xì)胞作用的試劑配合使用，促使質(zhì)粒進(jìn)入動物體。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于由所述的重組質(zhì)轉(zhuǎn)入豬霍亂沙門氏菌弱毒株或其他沙門氏菌弱毒株，或?qū)⑺黾邑i干擾素基因與任一病毒載體相連，獲得的活菌苗或活疫苗。

7.一種抗豬病毒藥物或佐劑，其特征在于是將家豬干擾素基因利用分子生物學(xué)技術(shù)克隆入真核表達(dá)載體獲得的重組質(zhì)粒，其中家豬干擾素基因是指編碼的氨基酸序列為SEQID?NO.1，SEQ?ID?NO.3，SEQ?ID?NO.5，SEQ?ID?NO.7，或SEQ?ID?NO.9；其對應(yīng)的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2，SEQ?ID?NO.4，SEQ?ID?NO.6，SEQ?ID?NO.8，SEQ?ID?NO.10，所述真核表達(dá)載體是具有真核啟動子，原核復(fù)制子或原核抗性基因為特征的任一種DNA表達(dá)載體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗豬病毒藥物或佐劑，其特征在于所述豬病毒為豬藍(lán)耳病病毒，豬口蹄疫病毒，豬流感病毒，或豬圓環(huán)病毒。

9.一種如權(quán)利要求7所述的抗豬病毒藥物或佐劑的制備方法，包括基因制備、重組、蛋白活性測定及表達(dá)載體質(zhì)粒的大規(guī)模抽提，其特征在于具體步驟如下：

(1)通過PCR的方法從家豬家豬肝臟基因組DNA中得到家豬新型干擾素完整基因；

(2)將上述基因插入原核克隆載體，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，測序后確定獲得了正確的基因；

(3)將上述基因插入真核表達(dá)載體獲得重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，抽提質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MARK-145細(xì)胞，用豬藍(lán)耳病病攻擊已轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，觀察保護(hù)情況，確定構(gòu)建的重組質(zhì)粒可以表達(dá)活性的家豬新型干擾素蛋白；

(4)陽性菌株在37℃發(fā)酵培養(yǎng)10-15小時，收集菌體；破碎菌體并大規(guī)模制備重組質(zhì)粒，與質(zhì)粒攜帶劑混合溶于生理鹽水，稀釋至合適濃度，即配制得基因工程藥物和疫苗佐劑；

或者將步驟(3)中所得的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入豬霍亂沙門氏菌弱毒株，陽性菌株在37℃發(fā)酵培養(yǎng)10-15小時，收集菌體，利用生理鹽水稀釋質(zhì)粒到合適的濃度，即配制得基因工程藥物和滅活疫苗佐劑。

10.如權(quán)利要求7所述的抗豬病毒藥物或佐劑的應(yīng)用，其特征在于是該藥物單獨(dú)作用，以任一攜帶方式進(jìn)入動物體內(nèi)作用，或與任意藍(lán)耳病疫苗或任意其他藥物聯(lián)合作用，用于預(yù)防和治療豬藍(lán)耳病。