[發明專利]用于檢測H5亞型禽流感病毒的生物芯片及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201010201662.7
• 申請日: 2010-06-09
• 公開（公告）號: CN102279266A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 何宏軒;崔大付;王海靜;李輝;張璐璐;董國英
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/552;G01N33/569;G01N21/21
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 曹津燕

1.一種用于檢測H5亞型禽流感病毒的生物芯片，其特征在于，所述生物芯片包括固相載體、附著于固相載體上的金膜、以及與該金膜相連接的抗H5N1亞型禽流感病毒單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的生物芯片，其特征在于，所述金屬膜的厚度為50～100nm。

3.根據權利要求1或2所述的生物芯片，其特征在于，所述生物芯片還包括位于所述金屬膜上的修飾層，選自聚丙烯酰胺、瓊脂糖及葡聚糖或其衍生物；優選地，所述葡聚糖衍生物為羧甲基葡聚糖。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的生物芯片，其特征在于，所述生物芯片的固相載體選自玻璃、陶瓷、金屬片、尼龍膜和硝酸纖維素膜，優選為玻璃，其規格為18mm×18mm×0.14mm。

5.制備權利要求1至4中任一項所述生物芯片的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)在生物芯片的固相載體上附著金膜；

2)將抗H5N1亞型禽流感病毒單克隆抗體固定在步驟1)所得到的金膜表面。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述步驟1)是通過真空蒸發鍍膜法在生物芯片的固相載體上附著金膜；優選地，所述步驟1)還包括用聚丙烯酰胺、瓊脂糖、葡聚糖或其衍生物修飾金膜的步驟；更優選地，所述步驟2)是通過氨基偶聯的方法在修飾的金膜上固定抗H5N1亞型禽流感病毒單克隆抗體。

7.權利要求1至4中任一項所述生物芯片在檢測H5亞型禽流感病毒及確定其含量中的用途。

8.使用權利要求1至4中任一項所述生物芯片的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)待測樣品的處理；

2)將權利要求1至4中任一項所述生物芯片安裝在表面等離子體諧振設備上；

3)將步驟1)中得到的樣品加入至步驟2)中的生物芯片上進行反應；優選地，所述反應條件如下：反應流速10～100μl/分鐘，反應體積為500～1000μl，在室溫下反應20～60分鐘；

4)利用表面等離子體諧振設備對所述檢測生物芯片上反應發生區進行偏振光檢測。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，其中所述步驟1)是通過樣品處理緩沖液對待測樣品進行處理，所述樣品處理緩沖液成份如下：NaCl?137mmol/L，KCl?2.7mmol/L，Na₂HPO₄?4.3mmol/L，KH₂PO₄?1.4mmol/L及2％(v/v)Triton?X-100，pH?7.2；優選地，所述樣品處理緩沖液與樣品的體積比為1∶1，處理時間優選為90分鐘或90分鐘以上。