[發明專利]檢測沙門氏菌血清型的復合基因芯片及其檢測方法

無效

• 申請號: 201010201331.3
• 申請日: 2010-06-13
• 公開（公告）號: CN101955993A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: 馮家望;王小玉;胡松楠;成曉維;游淑珠;鄺筱珊;周新朋
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國珠海出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10
• 代理公司: 廣東秉德律師事務所 44291
• 代理人: 楊煥軍;田學東

【技術領域】

本發明涉及基因芯片，尤其涉及一種檢測沙門氏菌血清型的復合基因芯片及其檢測方法。

【背景技術】

沙門氏菌是一群寄生在人類和動物腸道中能引起食物中毒并導致出現胃腸炎、傷寒和副傷寒等癥狀的細菌，分類屬腸桿菌科沙門氏菌屬(Salmone11a)，是重要的食源性致病菌。它們除可感染人外，還可感染很多動物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲等。人感染后可呈無癥狀帶菌狀態，也可表現為有臨床癥狀。1985年以來，在世界范圍內，由食源性沙門氏菌引起的已確診的人類患病人數顯著增加，1999年美國發生了由食用冰激凌引起的沙門氏菌疾病，有22400人患病；2002年，一批西班牙出口的雞蛋因含有沙門氏菌，造成英國有史以來最嚴重的疾病感染；2005年9月25日，洪都拉斯有600多人因食用了被沙門氏菌污染的雞而發生食物中毒；2005年11月，澳大利亞超市銷售的紫花苜蓿芽、綠豆、豆芽和其它芽菜被沙門氏菌污染，造成100多人食物中毒，其中包括部分幼兒。據美國The?EconomicResearch?Service(ERS)估計，美國每年由食源性致病菌引起的疾病約200萬起，其中沙門氏菌引起的病例達141萬起，居首位，由此引起的直接、間接經濟損失達30億美元。

沙門氏菌是一群生化反應和抗原結構相關的革蘭氏陰性桿菌，根據生化反應、DNA同源性等，Popoff等將沙門菌屬分為腸道沙門菌(S.enterica)和邦戈沙門菌(S.bongori)兩個種。腸道沙門菌又分為6個亞種，即腸道亞種(Subsp.enterica)、薩拉姆亞種(subsp.salamae)、亞利桑那亞種(subsp.enterica)、雙亞利桑那亞種(subsp.diarigonae)、豪頓亞種(subap.houtenae)和英迪加亞種(subsp.indica)。沙門菌屬下分血清型2463個，計有：腸道亞種1454個，薩拉姆亞種489個、亞利桑那亞種94個、雙亞利桑那亞種324個、豪頓亞種70個和英迪加亞種12個血清型，邦戈沙門菌僅20個血清型。

沙門氏菌的危害有血清型差異，部分血清型危害嚴重(如傷寒桿菌群)，有的危害較輕，所以區分沙門氏菌血清型顯得相當重要。目前國內、國際上還主要采用生化反應和血清凝集來進行血清型鑒定，由于生化反應主要以表型特征為依據，易受環境的變化而發生改變，而血清凝集反應可能發生種屬間交叉反應。另外傳統培養法操作復雜，耗時長，特別是不能適應口岸快速檢測的要求。

世界各國的學者都在致力于發展一種高特異性、高敏感性的快速、簡便的檢測方法，如金標試紙法、ELISA法、自動酶聯熒光免疫檢測系統(VIDAS)篩選法、PCR方法、多重PCR方法、熒光PCR法、rDNA指紋圖譜、RFLP等。然而，目前國內、國外眾多方法均不能很好地解決沙門氏菌屬及其屬下種群和血清型的高通量、快速鑒定問題。

基因芯片技術是近十幾年來在生命科學領域迅速發展起來的一項高新技術，基因芯片又稱DNA芯片，屬于生物芯片的一種，是指將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段有序地、高密度地排列固定于支持物上，待測的樣品核酸分子經過標記，與固定在載體上的DNA陣列中的點按堿基配對原理進行雜交，通過激光共聚焦熒光檢測系統等方法對芯片進行掃描，檢測雜交信號的強弱進而判斷靶基因分子的數量。基因芯片具有傳統的檢測方法不可比擬的優點：微型化、高通量、并行處理、快速分析、高準確性、高靈敏度、定量分析等，可同時對沙門氏菌屬及其屬下種群和血清型進行鑒定。

目前尚無采用基因芯片技術對沙門氏菌進行高通量、多基因快速檢測并鑒定血清型，尚無沙門氏菌血清型檢測國家標準及檢驗檢疫行業標準。

【發明內容】

本發明的目的是提供一種檢測沙門氏菌血清型的復合基因芯片，其對沙門氏菌血清型的檢測通量高、特異性強、靈敏度好、快速有效。

為實現上述目的，本發明采取如下技術方案：

一種檢測沙門氏菌血清型的復合基因芯片，其特征在于，將用于檢測沙門氏菌血清型的靶基因viaB、tyv、fliC-α、fliC1、rfbJ、fliC2、invA、hilA的探針整合于同一張芯片上，其中各靶基因的探針序列分別為：

TTCAGAATTA?ACCGTAAGGA?TATAGTAAAG?ATGAAATATT；

AGTTTGTACA?TGGTGATATT?CGCAACAAAA?ATGATGTTAC；

ATACTGGTTC?AATTAAGGAT?GGTAAGGTTT?ACTATAACAG；