[發明專利]川東燈臺報春的組培繁殖方法

無效

• 申請號: 201010199342.2
• 申請日: 2010-06-12
• 公開（公告）號: CN101855995A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 張長芹;薛建平;孫育紅
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所;昆明虹之華園藝有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 云南協立專利事務所 53108
• 代理人: 馬曉青

技術領域：

本發明涉及植物生物技術中植物組織培養方法，具體地說，涉及川東燈臺報春的組織培養快繁方法。

背景技術：川東燈臺報春(Primula?mallophylla)屬于報春花科報春花屬植物。川東燈臺報春的花玫瑰紫色，花色艷麗，具有較高的觀賞價值，據觀察發現，雖然川東燈臺報春在野外能夠正常開花，但由于生境的喪失，生殖隔離嚴重，很少結果實。因此，種子的缺乏給本種的繁育帶來了困難。迄今，川東燈臺報春沒有相關生物技術方法繁殖的研究與報道。為了使川東燈臺報春(Primula?mallophylla)在不能有性繁殖的基礎上，能成功進行繁殖使之能夠保存和可持續利用，需要研究該種的組織培養，并形成一套專門的組織培養繁殖技術體系。

發明內容：

本發明的目的是提供瀕危植物川東燈臺報春(Primulamallophylla)的組織培養方法，使之在生殖敗育的情況下能夠繁衍，使該物種的保存能夠得到保障，同時縮短離體培養時間，提高生根率和幼苗移栽率，為瀕危川東燈臺報春的可持續利用奠定組培種苗繁育基礎。

為了實現本發明的目的，本發明提供了如下的技術方案：

川東燈臺報春的組培繁殖方法，包括選擇外植體、消毒、叢生芽誘導，繼代并生根培養，試管苗移栽步驟，外植體取川東燈臺報春的莖尖，叢芽誘導培養基為1/2MS+2.0mg/l?6BA+0.2mg/l?NAA，pH5.4-5.8；繼代和生根培養基為1/2MS+1.5mg/l?6BA+0.5mg/lZT+0.15mg/l?NAA+0.5mg/l?IAA。

所述外植體消毒先用洗潔精加自來水，浸泡2-3分鐘，再用無菌水沖洗后晾2-3分鐘，然后采用0.1％升汞溶液進行表面消毒8-10分鐘。

所述叢芽誘導和繼代及生根培養的溫度為20-25℃，濕度30-45％.

所述叢芽誘導和繼代及生根培養的光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX。

移栽是生根組培苗在培養瓶內培養10天以后，煉苗3-4天，再移栽于溫室大棚。

移栽基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，pH為5.5-6.0。

移栽在早上8-11點以前，溫度為18-25℃下進行。

本發明方法可具體描述為：取川東燈臺報春的莖尖為外植體，用自來水加洗潔精進行浸泡和沖洗，然后用0.1％升汞溶液消毒8-10分鐘，無菌條件下用無菌水反復沖洗，接種至誘導培養基1/2MS+2.0mg/l6BA+0.2mg/l?NAA，pH5.4-5.8，溫度20-25℃，濕度30-45％，光照條件為自然光150-200LUX+人工輔助光1500-2000LUX下培養，長出叢芽后轉接入1/2MS+1.5.0mg/l?6BA+0.5mg/l?ZT+0.15mg/lNAA+0.5mg/l?IAA中進行增殖、繼代和生根，繼代3-4次，每次10天；組培苗煉苗3-4天后，移栽于基質為1份珍珠巖+1份腐殖土，pH為5.5-6.0，濕度50-60％的大棚內，每天早晚各噴水一次。

本發明技術方案的提出是基于下述的研究基礎：川東燈臺報春的模式標本由法國傳教士R.P.Farges于19世紀末期在川東城口區(今重慶市城口縣)大巴山地區首次采集并存放于法國巴黎植物標本館，其后被以不同的種名保存于英國邱園及愛丁堡植物園的標本館，1916年英國植物學家I.B.Balfour根據這些材料發表了此新種，之后再沒有植物學家采集到該種植物。因此在2004年出版的中國紅色名錄中，該種植物被認為已滅絕。本發明人在對重慶市城口縣大巴山地區進行野外考察時，采集到了中國特有瀕危植物種川東燈臺報春的標本。這是近百年來對該種除模式標本外的再度發現。通常以莖尖為外植體對報春花屬植物的破壞較大，但由于川東燈臺報春屬于瀕危植物又是百年以來在中國的再度發現，該種生殖隔離嚴重，在野外幾乎采集不到種子，亟需擴繁、保存和可持續利用。組培擴繁不僅可以在短時間內獲得大量的再生植株，而且通過莖尖再生的川東燈臺報春(Primula?mallophylla)試管苗生長健壯，移栽生長良好且能保持其優良性狀不變。試管苗移栽的溫度控制在18-25℃，最好在早上8-11點進行移栽，組培苗雖然在生長過程中很少受病蟲害的浸染，但為了預防病蟲害的發生，在生長季內噴施多菌靈、氧化樂果2-3次為宜。夏季要注意通風。

由于川東燈臺報春在野外缺乏種子，長期以往可能會有滅絕的危險，本發明的組培方法其優點在于：

1、通過建立川東燈臺報春(Primula?mallophylla)組培快繁方法，用于解決川東燈臺報春缺乏種子不能繁育可能導致滅絕的危險，為該物種的繁殖提供保障。