[發明專利]鱷膽素及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201010192702.6
• 申請日: 2010-06-07
• 公開（公告）號: CN101856368A
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發明（設計）人: 陳清西;熊佑熊;邱乒乒;康勁翮;張劍;李華亮;張祥盛
• 申請（專利權）人: 廈門大學;泰國是拉差龍虎園有限公司
• 主分類號: A61K35/56
• 分類號: A61K35/56;A61P35/00
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種鱷魚產品，尤其是涉及一種鱷膽素及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術

癌癥，醫學術語亦稱惡性腫瘤，中醫學中稱巖，是控制細胞生長增殖機制失常，組織和器官異常增生、弱化或喪失應有功能所致的一種古老的疾病。在中國，癌癥已經成為死亡率最高的疾病，取代了心血管疾病成為危害人類生命的“頭號殺手”。據世界衛生組織統計，每年世界有1100萬人患上癌癥，而死于癌癥人數約600萬，占全球死亡人數的12％。中國癌癥發病占全球的20.3％，每年新增癌癥患者220萬，死亡140萬，平均每3分鐘就有1.3人死于癌癥，而且癌癥的發病率呈急劇上升的趨勢。隨著生命科學的迅猛發展和癌癥研究的不深入，尋找高效抗腫瘤藥物已成為人類攻克癌癥最重要的課題之一。自從20世紀40年代應用第一個抗腫瘤藥物——氮芥成功地治療惡性淋巴瘤以來，抗腫瘤藥物的研究已取得了很大的發展?，F今臨床應用的絕大多數化療藥物屬細胞毒類，針對不同的作用靶點，通過抑制細胞生長、繁殖、誘導細胞分化、凋亡等達到治療腫瘤的目的。目前抗腫瘤藥物研究已進入一個全新的階段，已不局限于傳統的細胞毒藥物、分化誘導劑、生物反應調節劑，面臨著思路、理論及技術的更新。

鱷魚是一種古老的爬行動物，《本草綱目》等古代醫學典籍中均有關于鱷魚藥用價值的記載。早在南北朝時期的《本草經集注》就有對鱷魚甲的記載：“味辛，微溫。......主心腹癥瘕、伏堅、積聚、寒熱。”《本草拾遺》稱鼉甲“主惡瘡，腹內癥瘕”。明代李時珍的《本草綱目》“鱗部”第四十三卷則詳細記載了：“鼉(即鱷)甲主治心腹癥瘕；伏堅積聚；肉：主治少氣吸吸，足不立地；別錄濕氣邪氣、諸蠱內癥瘕、惡皰。脂：主治摩風及惡瘡。......?！鄙鲜霭Y瘕主要是指現代醫學中的卵巢癌，積聚指現代醫學中的肝癌。由此可見，鱷魚具有防止和抵抗腫瘤的藥用價值的論斷具有歷史依據。

公開號為CN1465351的發明專利申請提供一種抗癌新制品鱷魚免疫抗癌丸，是以人工飼養的鱷魚的皮甲、肉骨、膽汁、血液等經加工精制后作為主要成分。本品對部分白血病及已有轉移的中、晚期癌癥患者，收到較好效果。服用本品無任何毒性或副作用。

發明內容

本發明的目的在于提供鱷膽素及其制備方法。

本發明的另一目的在于提供鱷膽素在制備抗腫瘤藥物中的應用。。

本發明所述鱷膽素的制備方法包括以下步驟：

1)將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物；

2)在膽汁混合物中加入生理鹽水，攪拌抽提，離心后，取上清，過濾，得鱷膽素。在步驟2)中，所述生理鹽水的質量濃度可為0.9％；所述攪拌抽提的時間可為1h；所述離心，是20000g離心20min；所述微孔濾膜，可采用0.22μm微孔濾膜。

本發明所述鱷膽素的另一種制備方法包括以下步驟：

1)將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物；

2)在膽汁混合物中加入乙醇，浸漬，提取，合并提取液，旋轉蒸發儀真空蒸發、濃縮至無醇味，得乙醇提取物浸膏；

3)將乙醇提取物浸膏用水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3種有機溶劑，進行萃取分離，將萃取液真空濃縮去除有機溶劑，得鱷膽素；

在步驟2)中，所述乙醇可采用體積濃度為70％乙醇；所述提取，可分三次提取。

在步驟3)中，所述水，可采用蒸餾水；所述進行萃取分離，可按溶劑極性依次遞增法進行萃取分離，每種溶劑萃取3次。

所得鱷膽素可采用C₁₈反向高效液相色譜進行鱷膽素成分分析。

本發明所制備的鱷膽素是一種具有抗腫瘤功效的活性物質，可用于制備抗腫瘤藥物。

本發明利用有機溶劑分級萃取等現代生化技術對鱷魚膽汁進行分離純化，得到具有抗腫瘤活性的提取物(稱為鱷膽素)，并證明鱷膽素在抗腫瘤藥物中的應用。尤其是鱷膽素在抑制肝癌SMMC-7721細胞、膽管癌QBC939細胞、宮頸癌Hela細胞這3株腫瘤細胞的增殖，誘導3種腫瘤細胞凋亡方面具有良好的效應。

附圖說明

圖1為鱷膽素HPLC洗脫圖。色譜條件：色譜柱為SB-C18；檢測波長：210nm；流動相比例：甲醇-水(7∶3)，流速1mL/min。橫坐標為時間(min)，縱坐標為響應強度(mAU)。經高效液相色譜分離后，得到11個主峰，各峰的保留時間分別為1.595min，2.274min，2.608min，3.630min，5.170min，5.753min，7.663min，12.081min，12.444min，14.596min，31.265min。