[發明專利]熒光納米粒子Ru(bpy)3/SiO2、其制備方法及應用

無效

• 申請號: 201010185659.0
• 申請日: 2010-05-26
• 公開（公告）號: CN101864291A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 尹東光;劉斌虎;張禮;謝春娟;張樂
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C09K11/02;G01N33/52
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 陸聰明

技術領域

本發明涉及一種熒光納米粒子Ru(bpy)₃/SiO₂、其制備方法及應用。

背景技術

艾滋病是由人類免疫缺陷病毒感染所引起的一種嚴重的傳染性疾病。在目前尚無疫苗用于預防艾滋病的情況下，及時正確的診斷HIV感染是治療和減少艾滋病傳播的重要手段。目前，普遍采用的艾滋病常規診斷方法是ELISA法，但ELISA法一般在96孔板上進行，有著試劑消耗量大，檢測成本高，檢測時間長，檢測靈敏度不夠高且不能實現高通量化的缺點，難以實現對大量群體的高通量、高靈敏、快速檢測，如對疫情較嚴重地區人群的HIV普查、監測，獻血血源篩查等。

蛋白質微陣列芯片技術是采用微陣列方法，對樣品蛋白進行高通量、高靈敏、高特異性的分析技術。Li?QS等報導采用蛋白質微陣列芯片實行對HIV-1的早期診斷.Wu，JQ等報導采用蛋白質微陣列芯片檢測艾滋病的CD4+和CD8+T細胞的表面抗原。Burgess等報導以Cy3作熒光標記物采用蛋白質微陣列同步檢測HIV、HBV、HCV三種病毒。但以納米粒子作標記物應用于蛋白質微陣列芯片檢測HIV尚未見文獻報導。蛋白質微陣列芯片的檢測探針主要包括化學發光、酶、熒光等幾種。其中以熒光物質作探針的優點是可重復檢測、可使用多種熒光物質進行多標記對多種分析物同時檢測等。目前使用的熒光探針主要包括普通有機熒光染料、稀土配合物及熒光納米粒子等。相對于前兩者，熒光納米粒子的優勢是光穩定性好、熒光強度高、檢測靈敏度高、生物相容性好等。因而，近年來將納米粒子作為熒光探針應用于蛋白質微陣列芯片等生物分析領域得到迅速發展和廣泛應用。目前，可用作探針的納米粒子主要有貴金屬納米粒子、半導體量子點、及摻雜熒光分子的硅納米顆粒等。Petra?Pavlickova利用納米金制備了可檢測血清免疫球蛋白抗體的蛋白質芯片。Jesse?V.Jokerst等人利用CdSe/ZnS量子點作為蛋白質芯片上的熒光標記物成功檢測了三種主要的癌癥指標蛋白CEA，CA125和Her-2/Neu。Zhang?Heng等運用稀土配合物摻雜的二氧化硅納米顆粒對HBsAg進行時間分辨熒光免疫分析。Santra等人以熒光染料Ru(bpy)₃與二氧化硅復合的熒光納米顆粒標記羊抗人IgG，用于識別人外周血SmlgG⁺B淋巴細胞，均獲得高的檢測靈敏度。由于摻雜熒光分子的硅納米顆粒的一個納米顆粒中可包裹大量的熒光分子，因而具有強的熒光強度與檢測靈敏度，并且該類型納米粒子還具有良好的水溶性、生物相溶性、易于制備和表面易修飾等特點，因而成為目前研究的熱點。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種熒光納米粒子Ru(bpy)₃/SiO₂。

本發明的目的之二在于提供該熒光粒子的制備方法。

本發明的目的之三在于利用該熒光粒子在檢測HIV?p24抗原的應用

一種熒光納米粒子Ru(bpy)₃/SiO₂，其特征在于該熒光納米粒子為核殼結構，核殼結構以三聯吡啶釕為內核，在三聯吡啶釕的表面覆蓋網狀結構的二氧化硅，在二氧化桂表面帶有活性氨基基團，其中三聯吡啶釕與二氧化硅的質量比為：1∶180～1∶190，且每毫克納米粒子含有70～80nmol氨基。

上述的熒光納米粒子為規則球形，平均粒徑為64～76nm。

一種制備上述的熒光納米粒子Ru(bpy)₃/SiO₂的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：將環己烷、正己醇和Triton?X-100按20∶1∶10～25∶1∶14的體積比混合均勻后，加入水至溶液澄清透明，在再入Ru(bpy)₃水溶液，控制Triton?X-100與Ru(bpy)₃的摩爾比為6340∶1～6360∶1；攪拌均勻后按10∶1∶5～10∶1∶7的摩爾比依次加入正硅酸乙酯、3-氨丙基三甲氧基硅烷和氨水，并且正硅酸乙酯和Triton?X-100的摩爾比比為1∶9～1∶10；避光下攪拌反應22～26小時；加入丙酮破乳，超聲分散，離心分離，然后分別用無水乙醇和超純水洗滌以除去表面活性劑及未反應的原料雜質，真空干燥后，得到表面帶有氨基的Ru(bpy)₃/SiO₂熒光納米粒子。

一種上述的Ru(bpy)₃/SiO₂熒光納米粒子作為熒光探針在檢測HIV?p24抗原中的應用。