[發(fā)明專利]一種靈芝水溶性中性多糖GLP1及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010184061.X | 申請日： | 2010-05-20 |
| 公開（公告）號： | CN101857645A | 公開（公告）日： | 2010-10-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 黃生權(quán);敖宏 | 申請（專利權(quán)）人： | 無限極(中國)有限公司 |
| 主分類號： | C08B37/00 | 分類號： | C08B37/00 |
| 代理公司： | 廣州知友專利商標代理有限公司 44104 | 代理人： | 李海波 |
| 地址： | 529156 廣東省江*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 靈芝 水溶性 中性 多糖 glp1 及其 制備 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種多糖，具體涉及一種靈芝水溶性中性多糖GLP1及其制備方法。
背景技術(shù)
靈芝(Ganoderma?Lucidum)為擔(dān)子菌門擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬的一種藥用真菌，又稱“靈芝草”、“仙草”、“瑞草”，也叫長生草、靈草、還魂草，在我國有悠久的藥用歷史。我國古人認為靈芝是一種超自然的神藥仙草，東漢時期的《神農(nóng)本草經(jīng)》對靈芝的功效有詳細的極為肯定的記載，認為靈芝具有扶正固本、滋補強壯、延年益壽等功效。現(xiàn)代藥理學(xué)與臨床實踐進一步證實了靈芝能抗衰老、增強肌體免疫力，而且具有廣譜的抗病毒、抗腫瘤作用。現(xiàn)代科學(xué)研究表明靈芝藥理活性與其生物活性成分密切相關(guān)。
近年來，對靈芝營養(yǎng)成分的研究逐漸受到人們的重視，研究結(jié)果表明，靈芝的營養(yǎng)成分種類繁多，除含有六大營養(yǎng)成分還含有生理活性極高的多糖。趙桂梅等人分離純化出一種水溶性多糖；羅立新等人分離純化出一種水溶性多糖，從目前的研究結(jié)果可以看出，雖然一些學(xué)者已鑒定出一些靈芝多糖的結(jié)構(gòu)，但由于靈芝多糖的多樣性以及分離純化方法的差異性，造成靈芝多糖結(jié)構(gòu)的差異性，所以制備的靈芝多糖也不同。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種靈芝水溶性中性多糖GLP1及其制備方法，該方法工藝新穎、簡潔，采用該方法所制備的靈芝水溶性中性多糖GLP1純度和活性高。
為達到上述目的，本發(fā)明提供的靈芝水溶性中性多糖GLP1，由葡萄糖殘基Glcp和半乳糖殘基Galp組成，其摩爾比為34∶1，其峰位分子量為2.5×106Da，所述的GLP1主要由→4)Glcp(1→構(gòu)成主鏈，且每10個→4)Glcp(1→在6位有一個支鏈，所述的支鏈為→6)Glcp(1→和→4)Galp(1→，所述的支鏈的摩爾比為6∶1，所述的GLP1的結(jié)構(gòu)單元如下：
本發(fā)明所述的葡萄糖殘基Glcp是GLP1的主要單元，以1→4、1→6、1→4，6和1→連接方式存在，它們的摩爾比30.7∶12.1∶2.8∶1。
本發(fā)明所述的半乳糖殘基Galp是GLP1的另一單元，以1→4連接方式存在。
本發(fā)明提供的上述靈芝水溶性中性多糖GLP1的制備方法，含有下述步驟：
(1)取除雜后靈芝粉，按料液的重量體積比為1∶15～25加入水，先采用微波然后采用超聲波輔助提取得提取液；
(2)將步驟(1)所得提取液離心后，取上清液，加入工業(yè)酒精，靜置過夜，離心，取下層沉淀依次經(jīng)無水乙醇和丙酮洗滌，冷凍干燥，即為靈芝粗多糖；
(3)將步驟(2)所得靈芝粗多糖過陰離子交換柱，用NaCl水溶液進行線性梯度洗脫，收集流出液中的GLP1組分，上凝膠過濾層析柱，將所得組分真空濃縮，依次經(jīng)透析、濃縮、冷凍干燥后得靈芝多糖GLP1。
在上述步驟中：
步驟(1)中靈芝粉的除雜過程為：取靈芝粉，用工業(yè)酒精在60℃～80℃回流2～3次去雜，每次3～5h，離心后取下層沉淀在50℃～65℃干燥5～8h，得除去部分單糖、低聚糖和脂類化合物的靈芝粉。
上述靈芝粉的原料為赤靈芝子實體，所述的靈芝粉的粒度為≤30目，水分含量為13～15％。
步驟(1)中微波的功率為350～400W，提取時間為10～12min；超聲功率為550～600W，溫度為50～60℃，超聲的時間為60～70min，占空比為5S/5S。
步驟(2)中加入工業(yè)酒精至溶液的含醇量為75～85％。
步驟(3)中NaCl水溶液的摩爾濃度為0.1～1.5mol/L。
步驟(3)中透析時的截留分子量＞10000。
如附圖1-2所示，上述方法制備的GLP1經(jīng)HPLC毛細管電泳(CE)和高效液相色譜(HLPC)分離后只得到一個單峰，從而說明其分布均一，不含有其它雜質(zhì)，證明GLP1是一種水溶性中性多糖靈芝多糖。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明從靈芝中提取并純化得到單一級純多糖GLP1，并通過結(jié)構(gòu)鑒定得出其結(jié)構(gòu)單元和基本組成，為靈芝多糖的功能及其資源的深度開發(fā)提供參考。
附圖說明
圖1是GLP1的HLPC洗脫曲線圖；
圖2是GLP1高效毛細管電泳圖譜；
圖3是GLP1乙酰化的氣相色譜圖；
圖4是GLP1的紅外傅立葉轉(zhuǎn)換光譜圖；
圖5是GLP1的甲基化碎片GC/MS重構(gòu)總離子流圖；
圖6是GLP1的1H?NMR譜圖；
圖7是GLP1的DEPT-135°NMR譜圖；
圖8是GLP1的COSY-NMR譜圖；
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