[發明專利]高效液相色譜串聯質譜測定蜂膠中氯霉素殘留量的方法

有效

• 申請號: 201010181330.7
• 申請日: 2010-05-24
• 公開（公告）號: CN101865886A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發明（設計）人: 周萍;錢志來;陳建清;毛增亮
• 申請（專利權）人: 杭州蜂之語蜂業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06
• 代理公司: 杭州天欣專利事務所 33209
• 代理人: 陳紅

1.一種高效液相色譜串聯質譜測定蜂膠中氯霉素殘留量的方法，其特征在于：該方法所用到的原料包括純度大于99.0％的氯霉素標準品，濃度為100mg/l的D5-氯霉素標準品，為農殘級的乙酸乙酯，為分析純的氫氧化鈉，為優級純的正己烷，為液相色譜純的乙腈，蜂膠樣品；

該方法所用到的設備包括三重四極桿串聯質譜儀，配有二元泵、在線脫氣機、自動進樣器、數據處理軟件的高效液相色譜儀；所述三重四極桿串聯質譜儀中的離子源溫度為600℃，輔助加熱氣為55.00psi，干燥氣為65.00psi，氣簾氣為25.00psi，碰撞氣為5.00psi，電噴霧電壓為-4100.00V，離子化法為負離子模式；所述高效液相色譜儀為Agilent?1200series，色譜柱為Hypersil?ODS2，色譜柱的規格為4.6mm×150mm，5μm，柱溫為30℃，進樣量為20μl；

該方法包括標準溶液制備工序、標準曲線制作工序、蜂膠樣液制備工序和氯霉素殘留量檢測工序；所述標準溶液制備工序如下：a、氯霉素貯備標準溶液配制步驟：稱取氯霉素標準品10mg用乙腈定容至10ml配成濃度為1000mg/L的氯霉素貯備標準溶液，將該氯霉素貯備標準溶液置于-18℃以下保存待用；b、氯霉素中間標準液配制步驟：取a中的氯霉素貯備標準溶液100μl用乙腈定容至10ml配成濃度為10mg/L的氯霉素中間標準液；c、氯霉素氘代內標中間液配制步驟：采用D5-氯霉素標準品代替氯霉素標準品，重復上述a步驟和b步驟，制得濃度為10mg/L的氯霉素氘代內標中間液；d、臨時標準使用液配制步驟：取氯霉素中間標準液用體積濃度為30％的乙腈水溶液配至5μg/kg和50μg/kg，取氯霉素氘代內標中間液用體積濃度為30％的乙腈水溶液配至200μg/kg；

所述標準曲線制作工序中，取標準溶液制備工序中制得的氯霉素貯備標準溶液、氯霉素中間標準液、氯霉素氘代內標中間液和臨時標準使用液，通過高效液相色譜儀和三重四極桿串聯質譜儀得到標準曲線；

所述蜂膠樣液制備工序中，取蜂膠樣品2g和濃度為200μg/kg的D5-氯霉素標準品內標50ul置于一號50ml離心塑料瓶中并充分混合，然后靜置5min以上，再向一號50ml離心塑料瓶中加入5ml濃度為1mol/L的NaOH溶液并不斷振蕩提取5min，使蜂膠樣品充分溶解，然后向一號50ml離心塑料瓶中加入5ml水并搖勻，再向一號50ml離心塑料瓶中加入10ml濃度為5％的HClO₄進行酸化并充分搖勻而制得蜂膠液；該蜂膠液先在常溫下超聲提取5min，再在轉速為3000rpm下離心5min而得到上層離心液，然后對上層離心液進行過濾而制得濾液；取濾液10ml置于二號50ml離心塑料瓶中，用濃度為1mol/L的NaOH溶液將濾液的pH值調節到10.5，然后向二號50ml離心塑料瓶中加入10ml乙酸乙酯并充分混合3min，在轉速為3000rpm下離心2min而得到乙酸乙酯層，然后將乙酸乙酯層置于15ml塑料離心管中，該乙酸乙酯層在35℃下進行氮氣吹干，再向15ml塑料離心管中加入體積濃度為30％的乙腈水溶液1ml并進行超聲溶解，然后向15ml塑料離心管中加入2ml正己烷并充分混合而制得離心液，將該離心液在轉速為800rpm下離心2min而得到下層樣液，最后將下層樣液過0.22μm的濾膜而制得蜂膠樣液；

所述氯霉素殘留量檢測工序中，取蜂膠樣液制備工序中制得的蜂膠樣液，通過高效液相色譜儀和三重四極桿串聯質譜儀，并結合標準曲線制作工序中得到的標準曲線而測得蜂膠中氯霉素的殘留量；該方法的檢測限為0.1μg/kg，定量限為0.3μg/kg。

2.根據權利要求1所述的高效液相色譜串聯質譜測定蜂膠中氯霉素殘留量的方法，其特征在于：該方法所使用的水為雙重蒸餾水。

3.根據權利要求1所述的高效液相色譜串聯質譜測定蜂膠中氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所述蜂膠樣液制備工序中，向一號50ml離心塑料瓶中加入濃度為1mol/L的NaOH溶液溶解蜂膠樣品，然后用水稀釋以釋出蜂膠樣品中的氯霉素殘留物，再用HClO₄進行酸化以沉淀蜂膠樣品中的蜂膠成分。

4.根據權利要求1或2所述的高效液相色譜串聯質譜測定蜂膠中氯霉素殘留量的方法，其特征在于：所述蜂膠樣液制備工序中，蜂膠樣液用濃度為1mol/L的NaOH溶液將濾液的pH值調節到10.5，乙酸乙酯層在35℃下采用氮吹儀進行氮氣吹干，再向15ml塑料離心管中加入體積濃度為30％的乙腈水溶液1ml并采用超聲波儀進行超聲溶解。