[發(fā)明專利]新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)和檢測該系統(tǒng)的微型基因組及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010179881.X
• 申請日: 2010-09-22
• 公開（公告）號: CN101928727A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邊惠潔;尉丁;馮浩;南剛;陳志南
• 申請（專利權(quán)）人: 陳志南
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/63;C12N7/01;C07K14/125;C12Q1/68;C12Q1/66;C12Q1/02;G01N33/53;G01N21/64
• 代理公司: 西安文盛專利代理有限公司 61100
• 代理人: 彭冬英

1.新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)，包括基于pcDNA3.1(+)質(zhì)粒構(gòu)建的新城疫病毒Italien株的NP基因、P基因和L基因的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-NP、pcDNA-P和pcDNA-L，其中NP基因表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-NP包含SEQ?No?1的序列，其表達(dá)產(chǎn)物包含SEQ?No?4的氨基酸序列，P基因表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-P包含SEQ?No?2的序列，其表達(dá)產(chǎn)物包含SEQ?No?5的氨基酸序列，L基因表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-L包含SEQ?No?3的序列，其表達(dá)產(chǎn)物包含SEQ?No?6的氨基酸序列，上述質(zhì)粒在真核細(xì)胞中分別表達(dá)新城疫病毒Italien株NP蛋白、P蛋白和L蛋白。

2.新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)，包括新城疫病毒Italien株的NP基因、P基因和L基因的表達(dá)質(zhì)粒T7-NP、T7-P和T7-L，所述的質(zhì)粒只存在T7RNA聚合酶啟動(dòng)子，并且在下游依次插入內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(IRES)序列和新城疫病毒Italien株的NP、P和L蛋白編碼序列，其中NP基因表達(dá)質(zhì)粒T7-NP包含SEQ?No?1的序列，其表達(dá)產(chǎn)物包含SEQ?No?4的氨基酸序列，P基因表達(dá)質(zhì)粒T7-P包含SEQ?No2的序列，其表達(dá)產(chǎn)物包含SEQ?No?5的氨基酸序列，L基因表達(dá)質(zhì)粒T7-L包含SEQ?No3的序列，其表達(dá)產(chǎn)物包含SEQ?No?6的氨基酸序列，上述質(zhì)粒在含有T7?RNA聚合酶的真核細(xì)胞中分別表達(dá)新城疫病毒Italien株NP蛋白、P蛋白和L蛋白。

3.檢測如權(quán)利要求1所述的新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)的微型基因組，其特征在于：在T7RNA聚合酶啟動(dòng)子序列和丁型肝炎病毒自身催化核酶(HDVribozyme)序列之間，反向插入新城疫病毒Italien株基因組3′非編碼區(qū)cDNA序列、標(biāo)簽蛋白編碼序列以及新城疫病毒Italien株基因組5′非編碼區(qū)cDNA序列，其中新城疫病毒Italen株基因組3′非編碼區(qū)cDNA序列包含SEQ?No?7的序列，新城疫病毒Italien株基因組5′非編碼區(qū)cDNA序列包含SEQ?No?8的序列，所述的微型基因組由T7RNA聚合酶引導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在同時(shí)存在新城疫病毒Italien株NP蛋白、P蛋白和L蛋白時(shí)，在真核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)其攜帶的標(biāo)簽蛋白。

4.檢測如權(quán)利要求2所述的新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)的微型基因組，其特征在于：在T7RNA聚合酶啟動(dòng)子序列和丁型肝炎病毒自身催化核酶(HDVribozyme)序列之間，反向插入新城疫病毒Italien株基因組3′非編碼區(qū)cDNA序列、標(biāo)簽蛋白編碼序列以及新城疫病毒Italien株基因組5′非編碼區(qū)cDNA序列，其中新城疫病毒Italien株基因組3′非編碼區(qū)cDNA序列包含SEQ?No?7的序列，新城疫病毒Italien株基因組5′非編碼區(qū)cDNA序列包含SEQ?No?8的序列，所述的微型基因組由T7?RNA聚合酶引導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在同時(shí)存在新城疫病毒Italien株NP蛋白、P蛋白和L蛋白時(shí)，在真核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)其攜帶的標(biāo)簽蛋白。

5.如權(quán)利要求1所述的新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)作為體外制備重組病毒或者作為制備病毒微型基因組的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求2所述的新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)作為體外制備重組病毒或者作為制備病毒微型基因組的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求3所述的檢測新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)的微型基因組作為體外制備重組病毒或者作為制備新城疫病毒Italien株NP蛋白、P蛋白和L蛋白或功能鑒定中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求4所述的檢測新城疫病毒Italien株輔助表達(dá)質(zhì)粒系統(tǒng)的微型基因組作為體外制備重組病毒或者作為制備新城疫病毒Italien株NP蛋白、P蛋白和L蛋白或功能鑒定中的應(yīng)用。