[發(fā)明專利]一種中國陸生常見蝰科蛇毒多價抗血清的制備方法及用法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010179174.0
• 申請日: 2010-05-21
• 公開（公告）號: CN101843902A
• 公開（公告）日: 2010-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭穎;范泉水;葉峰平;邱薇;張富強(qiáng);張志曉
• 申請（專利權(quán)）人: 成都軍區(qū)疾病預(yù)防控制中心軍事醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K9/19;A61P39/02;A61K35/16
• 代理公司: 昆明科陽知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 53111
• 代理人: 孫山明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于抗蛇毒血清，特別是涉及多價抗血清的制備及多價抗血清的使用方法。

背景技術(shù)

毒蛇屬種具有很大的地區(qū)差異性，同一種類的毒蛇由于地區(qū)差異所產(chǎn)生的蛇毒毒性成分不同。中國陸生常見蝰科蛇以中國南方地區(qū)蝰蛇、烙鐵頭蛇、蝮蛇、五步蛇、竹葉青的蝰科蝮亞科和蝰亞科毒蛇為主。在毒蛇咬傷后如果能夠鑒別毒蛇種類，首先應(yīng)考慮使用單價抗蛇毒血清，然而，資料表明在某一地區(qū)被不同種類蛇傷的全身癥狀相似，蛇傷患者中能夠鑒定出咬傷蛇種類的僅占20％，臨床上很難或者不可能有針對性地使用單價抗蛇毒血清，反而由于免疫性疾病造成的損害，導(dǎo)致治療失敗和昂貴的抗蛇毒血清浪費(fèi)。目前我國生產(chǎn)的抗蛇毒血清均為單價，相關(guān)技術(shù)包括由申請人此前提出的“抗蝰蛇蛇毒凍干血清及制備方法”(發(fā)明專利申請?zhí)?1010141970.5)，該方法的結(jié)果表明按所選劑量誘導(dǎo)馬免疫應(yīng)答收集的IgG血漿，通過酶解并疏水層析能夠獲得純化的F(ab)’₂片段，當(dāng)滿足一定比例時，F(xiàn)(ab)’₂能夠與小鼠體內(nèi)蛇毒特異性結(jié)合，從而中和溶解蛇毒。但是，該申請仍然為單價抗蛇毒血清。

發(fā)明內(nèi)容

針對我國常見蝰科毒蛇品種和特點(diǎn)，本發(fā)明目的是提供一種能夠有效中和我國常見蝰科毒蛇平均排毒量的多價抗蛇毒血清制劑的制備方法，并提供相應(yīng)的使用方法。

本發(fā)明通過以下方式實(shí)現(xiàn)：

從免疫馬血漿獲得純化的F(ab)’₂片段，并且：

用小鼠中和法分別測定抗五步蛇、抗蝰蛇和抗蝮蛇毒F(ab)’₂凍干品效價，即：

五步蛇蛇毒的LD₅₀為3.25μg·g^-1，抗五步蛇毒血清F(ab′)₂凍干品與五步蛇蛇蛇毒質(zhì)量比為10∶1(mg∶mg)；

蝰蛇蛇毒的LD₅₀為1.75μg·g^-1，抗蝰蛇毒血清F(ab′)₂凍干品與蝰蛇毒質(zhì)量比為15∶1(mg∶mg)；

蝮蛇蛇毒的LD₅₀為3.0μg·g^-1，抗蝮蛇毒血清F(ab′)₂凍干品與蝮蛇毒質(zhì)量比為20∶1(mg∶mg)；

稱取抗五步蛇蛇毒血清600-870mg、抗蝰蛇毒血清400-550mg及抗蝮蛇血清500-650mg，用305ml注射用水復(fù)溶，經(jīng)0.22um膜過濾后灌裝成10ml/瓶注射劑，凍干。

所述的所制備的多價抗血清F(ab)’₂分子量為95-110Kda，F(xiàn)(ab)’₂含量大于85％，IgG含量小于5％，F(xiàn)c片段含量小于10％。

所制備的多價抗血清用法及劑量為：靜脈注射，成人1500-2070mg/次，兒童與成人同劑量，一次/日，病情緩解較慢時可適當(dāng)增加劑量。

本發(fā)明通過選擇達(dá)到一定效價水平的幾種蝰科毒蛇的特異性單價抗蛇毒血清F(ab)’₂，按照選擇的劑量范圍裝量成注射劑，提供一種能夠中和蝰科不同種類的蛇毒的多價抗蝰科蛇毒血清。經(jīng)小鼠中和法檢測該血清能有效中和我國常見五種蝰科毒蛇的平均一次排毒量，包括尖吻蝮蛇毒80-110mg、或蝰蛇毒30-55mg、或烙鐵頭蛇毒55-75mg、或竹葉青蛇毒20-35mg、或蝮蛇毒20-35mg，可以直接應(yīng)用于蛇傷重?；颊?，而不需要鑒定咬傷蛇的種類，從而降低蛇傷重患率和死亡率。本發(fā)明制備的多價抗蝰科蛇毒血清本發(fā)明制備工藝穩(wěn)定、高效，產(chǎn)品純度高于《中國藥典》2010年版中單價抗蛇毒血清的標(biāo)準(zhǔn)，其它項(xiàng)目符合《中國藥典》2010年版中單價抗蛇毒血清的標(biāo)準(zhǔn)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明多價抗蝰科蛇毒血清非還原性SDS-PAGE電泳圖譜。圖中，1.穿透峰；2.80-65ms/cm洗脫峰；3.65-55ms/cm洗脫峰；4.55-30ms/cm洗脫峰；5.30-5ms/cm洗脫峰；6.標(biāo)準(zhǔn)MK。

圖2為抗五步蛇毒免疫血漿ELISA分析結(jié)果圖。

圖3為抗蝮蛇毒免疫血漿ELISA分析結(jié)果圖。

圖4為抗蝰蛇蛇毒免疫血漿ELISA分析結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

??????????(一)本發(fā)明制備方法及對蝰科蛇毒中和試驗(yàn)效果

實(shí)施例1：